[发明专利]血管生成抑制因子的制备方法

摘要

本发明提供的血管生成抑制因子的制备方法，先将赤魟软骨粉碎，再经抽提、粗分、纯化，最后脱盐，冷冻干燥，获得赤魟软骨血管生成抑制因子，简写为DCAIF－I其中纯化采用Hitrap DEAEFF离子交换柱层析、Superdex 75 10/300 GL柱层析、Shim－packVP－ODSHPLC柱层析。本发明所提供的血管生成抑制因子的制备方法，提出了一条从赤魟软骨中提取血管生成抑制因子的方法，且所制得的DCAIF－I经试验能有效抑制血管生成，且有一定的浓度依赖性。该制备方法是一种有效、优化的从赤魟软骨中提取血管生成抑制因子的方法。

主权项

1.一种血管生成抑制因子的制备方法，其特征是先将赤魟软骨粉碎，再经抽提、粗分、纯化，最后脱盐，冷冻干燥，获得赤魟软骨血管生成抑制因子，其英文缩写名记为DCAIF-I，其中抽提是：先将粉碎的赤魟软骨按1∶4-6的比例放置于抽提液中，该比例为重量与体积比，单位是g∶mL，所说抽提液中含0.05-0.1mol/L的MES、重量/体积百分比为0.02％的EDTA和1.0-2.0mol/L的盐酸胍，随后将pH值调至5.4-6.2，于15-30℃下振荡72h，再于4℃下，10000r/min离心，弃残渣，得上清液为赤魟软骨抽提液；粗分是：先将赤魟软骨抽提液经超滤获取分子量在3-200KD的赤魟软骨血管生成抑制因子粗提液，再将赤魟软骨血管生成抑制因子粗提液用丙酮作分级沉淀，获得的沉淀以pH值为7.0-7.6、浓度为0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液进行透析，再经冷冻干燥获得赤魟软骨血管生成抑制因子粗制品；纯化是：取血管生成抑制因子粗制品先用Hitrap 26/10 Desalting柱进行脱盐，再用Hitrap DEAE FF离子交换柱进行层析，获得10个明显的分离峰，收集第1峰；再用Superdex75 10/300GL柱进行层析，获得4个明显的分离峰，收集第1峰；再用Shim-pack VP-ODSHPLC柱进行层析，获得3个明显的分离峰，收集第1峰。