[发明专利]一种新型检测重型乙型肝炎的质谱分析试剂盒和方法

摘要

本发明涉及一种检测、评估重型乙型肝炎病人的试剂盒和新方法，为一种非侵入性的体外检测方法。本方法用质谱法进行鉴别检测发现一种新型变异的β2－微球蛋白。变异的β2－微球蛋白或11729±15Da峰值可用于重型乙型肝炎的检测及评估。变异的β2－微球蛋白或11729±15Da峰值升高者提示预后差。重型乙型肝炎中血清变异的β2－微球蛋白水平显著高于急性乙型肝炎；重型乙型肝炎死亡者血清变异的β2－微球蛋白水平显著高于存活者。本发明提供方法能够检测重型乙型肝炎的危重病人，其灵敏度为100％，特异性为100％。通过11729±15Da峰值或被抗体吸附表面基质上捕获的变异的β2－微球蛋白，用标准化质控血清控制下的定量性质谱分析来检测，可以应用到已经脱离人体的体液中的生物标志组合的检测方法或试剂盒开发。本方法准确、方便且快捷。

主权项

1.本发明涉及一种检测、评估重型乙型肝炎病人的试剂盒和新方法，其特征是采用质谱法对样品中已被基质捕获的变异的β2-微球蛋白生物标志进行精确地鉴别、检测的方法。该方法通过以下步骤实现：(1)样品处理及质谱标准化质控血清制备；(2)样品上样至基质上；(3)洗涤；(4)质谱的定量控制及质谱测试；其中所述步骤(1)将生物样品稀释在稀释缓冲溶液中。用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清及样品点样在基质上。所述步骤(3)用结合缓冲液洗涤。在样品完全干燥前将第一份洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留10秒。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份洗涤液重复以上步骤。用0.5～2％三氟乙酸彻底洗涤磁珠，将生物标志洗脱至质谱专用的金属片上，自然干燥金属片，加0.5μL以50％乙腈，0.5％三氟乙酸制备的吸能分子标准溶液。吸能分子可用Sinapinic acid或alpha-Cyano-4-hydroxycinnamic acid等；所述步骤(4)用质谱仪去分析变异的β2-微球蛋白。用计算机分析数据为11729±15Da峰值。定量性质谱调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清，将标准化质控血清中用于定量的标准峰4091.1Da或6634.0Da强度调至50％信号强度的最大值。