[发明专利]用于去除所选择DNA序列的方法和手段

摘要

本发明描述用于使用处于小孢子特异性启动子控制下表达切点罕见双链断裂诱导DNA内切核酸酶通过在两个同向重复DNA序列间的染色体内重组而从DNA分子内精确去除所选择亚片段的方法。本方法可以应用于用来将植物细胞和植物内的靶DNA片段精确交换成目的DNA片段的方法内。

主权项

1.用于将目的DNA分子导入植物细胞或植物的基因组内，随后去除所述目的DNA分子的亚序列的方法，包括步骤：a.将所述目的DNA分子导入所述植物细胞的基因组内，所述目的DNA分子包含侧翼为同向重复排列的两个DNA序列的所述DNA分子的所述亚序列并且还包含至少一个切点罕见双链DNA断裂诱导(DSBI)酶的识别位点，其中所述识别位点位于以同向重复排列的所述两个DNA序列附近，优选地位于它们之间；b.选择在其中所述目的DNA分子整合进入基因组内的植物细胞并从所述植物细胞再生植物；c.将所述植物与包含编码DSBI酶的嵌合基因的第二个植物杂交，其中所述嵌合基因包含如下有效连接的DNA区段：i.小孢子特异性启动子；ii.编码识别所述识别位点的双链DNA断裂诱导酶的DNA区域；iii.转录终止和聚腺苷酸化区域；d.选择包含所述目的DNA分子和编码DSBI酶的所述嵌合基因的后代植物(F1植物)；e.将所述后代植物与另一植物杂交，由此使用所述后代植物作为花粉供体；f.选择包含编码DSBI酶的所述嵌合基因的后代植物的群体(F2群体)；和g.选择在其中所述DNA分子的亚序列已经通过以同向重复排列的所述两个DNA序列间的同源重组被缺失的后代植物。