[发明专利]配对末端测序无效
| 申请号： | 200680028181.2 | 申请日： | 2006-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN101351552A | 公开（公告）日： | 2009-01-21 |
| 发明（设计）人： | J·伯卡;Z·陈;M·埃格霍姆;B·C·戈德温;S·K·哈奇森;J·H·利蒙;G·J·萨基斯;J·F·西蒙斯 | 申请（专利权）人： | 454生命科学公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 刘冬;黄可峻 |
| 地址： | 美国康*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明提供一种制备目标核酸片段的方法，以生产含目标核酸的两个末端的较小核酸。具体地说，本发明提供克隆和DNA操作策略，以将大目标核酸的两个末端分离到单个小DNA构建物中，用于快速克隆、测序或扩增。 | ||
| 搜索关键词： | 配对 末端 | ||
【主权项】：
1.一种获得DNA构建物的方法，所述DNA构建物包含目标核酸的两个末端区域，所述方法包括以下步骤：(a)片段化大核酸分子，以生产目标核酸；(b)将捕捉元件连接至所述目标核酸，以形成第一环形核酸分子；(c)用切割所述目标核酸但不切割所述捕捉元件的限制性内切核酸酶消化所述第一环形核酸，以产生含所述目标核酸的两个末端的线性核酸，所述两个末端由所述捕捉元件分隔；(d)将所述线性核酸与分隔元件连接，以形成第二环形核酸；(e)将所述第二环形核酸转变为环形单链核酸；(f)使第一寡核苷酸对所述环形单链核酸退火，并通过滚环扩增来扩增所述环形单链核酸，以产生单链滚环扩增产物；(g)使第二寡核苷酸对所述单链滚环扩增产物退火，以在所述单链滚环扩增产物中形成多个双链区；和(h)使用切割所述多个双链区的限制性内切核酸酶将所述单链滚环扩增产物消化为小片段，以产生含目标核酸的两个末端区的所述DNA构建物。
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