[发明专利]包括SORF构建体的多基因表达和使用多蛋白、前体蛋白和蛋白酶解的方法

摘要

公开的是有用的构建体和方法，用于蛋白质的表达，使用重组宿主细胞内加工的初级翻译产物。描述了包括单个开放阅读框(sORF)的构建体，用于蛋白质的表达，包括多个多肽的表达。初级翻译产物(前体蛋白或多蛋白)含有多肽，如蛋白内含子或hedgehog家族自体加工结构域，或其变体，框内插入多个目标蛋白亚基之间。初级产物还可以含有裂解序列，如其他蛋白酶解裂解或蛋白酶识别位点，或含有信号肽酶识别序列的信号肽，隔开多个蛋白亚基中的至少两个。可以操纵插入的自体加工多肽或裂解位点的序列来提高分开的多个蛋白亚基的表达效率。还公开了进行蛋白质如免疫球蛋白的有效表达，分泌和/或多亚基装配的独立方面。在多蛋白含有免疫球蛋白重链和轻链片段或能够抗原识别的片段的情况中，在一个实施方案中，可选择的化学计量比为每个重链片段至少两个轻链片段的拷贝，结果是形成了正确折叠和装配的功能抗体的产生。描述了修饰的信号肽，包括来自免疫球蛋白轻链的那些。

主权项

1.用于产生一个或多个重组蛋白产物的包括sORF插入片段的表达载体；所述sORF插入片段包括编码第一个多肽的第一个核酸序列，编码第一个蛋白裂解位点的第一个插入核酸序列，和编码第二个多肽的第二个核酸序列；其中将编码所述第一个蛋白裂解位点的所述插入核酸序列可操纵地置于所述第一个核酸序列和所述第二个核酸序列之间；并且其中所述表达载体能够表达在所述第一个蛋白裂解位点可裂解的sORF多肽。