[发明专利]黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体和表达产物及其构建制备方法

摘要

黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体和表达产物及其构建制备方法，涉及一种可高效表达黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体的构建与表达。黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体是在含有E.coliTrc启动子、蛋白质工程改造过的CKS基因及组氨酸标签(His－Tag)的原核表达载体pTrc－CKS上连接黑鲷Hepcidin基因所构建成的pTrc－CKS/hepcidin表达质粒，具有P3C酶切割位点，C术端融合6个组氨酸。其融合表达产物CKS－hepcidin可通过C末端His－Tag亲和层析纯化，纯化的融合产物可用P3C酶将融合蛋白中的CKS切除，获得纯化的Hepcidin。

主权项

1.黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体，其特征在于所述的黑鲷抗菌肽Hepcidin的表达载体是在含有E.coli Trc启动子、蛋白质工程改造过的CKS基因及组氨酸标签的原核表达载体pTrc-CKS上连接黑鲷Hepcidin基因所构建成的pTrc-CKS/hepcidin表达质粒，具有P3C酶切割位点，C末端融合6个组氨酸，pTrc-CKS/hepcidin重组载体诱导表达的蛋白为328aa；其碱基序列如下：agcatgccag actctctcga agttctgttt cagggtccag caggatctgg ctcattcact  780gaggtgcaag agccggagga gccaatgaac aatgagagtc cagttgctgc acatgaagag  840aagtcagagg agtcctggaa gatgccgtat aacaacagac acaagcgcag ccccgctggt  900tgtcgctttt gctgcggttg ctgtcctaac atgagaggat gtggtgtctg ctgcaggttc  960tctagccacc atcatcatca tcat                                         984氨基酸序列如下：                                          ↓P3C切点Ser Met Pro Asp Ser Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Ala Gly Ser Gly Ser PheThr Glu Val Gln Glu Pro Glu Pro Met Asn Asn Glu Ser Pro Val Ala Ala His GluGlu Lys Ser Glu Glu Ser Trp Lys Met Pro Tyr Asn Asn Arg His Lys Arg Ser ProAla Gly Cys Arg Phe Cys Cys Gly Cys Pro Asn Met Arg Gly Cys Gly Val Cys CysArg Phe Ser Ser