[发明专利]一种云柚菇抗病毒蛋白及其分离纯化方法

摘要

一种云柚菇抗病毒蛋白的分离纯化方法，包括制备云柚菇蛋白粗提液、离子交换层析和凝胶层析，分离纯化的云柚菇抗病毒蛋白分子量为17KDa。云柚菇粗提液对TMV的抑制率可高达94.3％；云柚菇抗病毒蛋白对白血病细胞HL－60有强烈的凝集作用，用于进一步开发抗肿瘤药物，具有很大的潜在价值。

主权项

1、一种云柚菇抗病毒蛋白的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)称取云柚菇子实体干品粉末15g，加入200mL的蒸馏水，4℃静置浸提8h-10h，4℃10,000r/min离心15min，收集上清液；将上清液用0％-40％的(NH4)2SO4沉淀，4℃静置4h-8h，4℃11,000r/min离心25min，弃沉淀，得上清A液；将A液再40％-60％的(NH4)2SO4 沉淀，4℃静置4h-8h，4℃11,000r/min离心25min，得上清B液；B液再60％-80％的(NH4)2SO4沉淀，静置4h-8h，4℃11,000r/min离心25min，得沉淀；将沉淀用蒸馏水悬浮，透析袋中对pH7.8，0.01mol/L PBS缓冲液透析24h，中间换液3-4次，得蛋白液，4℃10,000r/min离心10min，弃沉淀，得上清液C液；(2)离子交换层析：采用1.6cm×10cm柱子，DEAE-sepharoseFF装柱后，用pH7.8，0.01mol/L PBS缓冲液平衡柱子；将C液上样，结束后用pH7.8，0.01mol/L PBS缓冲液洗柱，然后用0mol/L-0.3mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速1.5mL/min，分部收集流出液，将收集的各管在280nm下测紫外吸收值；选紫外吸收值最高的流出液作透析处理24h，换液3-4次，将透析液用聚乙二醇20,000浓缩并收集，检测抗TMV活性，得D液；(3)凝胶层析：用含0.15mol/L NaCl的pH7.8，0.01mol/L PBS缓冲液平衡Sephacryl S-200，D液上样1.5mL，流速0.15mL/min，分部收集流出液，将收集的各管在280nm测紫外吸收值；选紫外吸收值最高的流出液作透析处理，并进行抗TMV活性和纯度检测，得YY蛋白液，经冻干处理，得YY蛋白。