[发明专利]一种检测土壤脲酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中脲酶活性的分析方法：1)称取筛分的土壤风干样品n份于n支粗试管中，分别加入甲苯处理10－15分钟后，向各试管中加入磷酸盐缓冲溶液；然后向n－1支试管中加入的尿素溶液，向另1试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；混匀后，塞上橡皮塞，恒温培养培养48h；2)往试管中加入的氯化亚汞溶液以终止反应，用氯化钾溶液稀释至20mL。振荡，过滤；3)用扩散法测定生成的氨；4)计算脲酶活性。本发明的优点为：1)与传统方法相比，省略了显色比色过程，简化了操作步骤；2)减对分光光度计等设备要求高的依赖性；3)准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1. 一种检测土壤中脲酶活性的分析方法，其特征在于：1)分别称取n份5-10g过1-2mm筛的土壤风干样品于n支粗试管中，n≥2，每支试管中分别加入2-4mL甲苯处理10-15分钟后，向各试管中加入10-40mL 0.5M磷酸盐缓冲溶液；然后向n-1支试管中加入5-10mL重量浓度10-20％的底物尿素溶液，向另1试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；混匀后，塞上不透气的橡皮塞，将试管放在39-41℃的恒温培养箱中培养48h，每24h振荡一次；同时作试剂空白对照，即不加土壤，其余同样品处理；2)分别向上述试管中加入5-15mL重量浓度0.5％-1％的氯化亚汞溶液以终止反应，并用重量浓度15-18％氯化钾溶液将试管内溶液稀释至20mL；3)振荡30分钟，用致密滤纸过滤；4)用扩散法测定生成的氨量；在Conwey皿的内室，注入2mL 0.1NHCI和两滴万用指示剂，吸取4-6mL的滤液放入皿的外侧，加入5mLK2CO3饱和溶液以析出气态氮；立即将皿盖好，仔细摇荡后在室温下放置48h；用0.1N NaOH回滴过剩的酸至绿色，以测的结合的氨；5)计算生成的氨量；6)计算脲酶活性：计算公式为：x＝[(V1a-V2b)*1.4*V3]*100/(W*T*V4)式中：x为脲酶活性(mg NH4 +-N.100g-1.48h-1)；V1为置于皿中内室的0.1N HCI的毫升数；V2为用于滴定过剩酸的0.1N NaOH的毫升数；a＝0.99-1.05为0.1N HCI滴定度的修正值；b＝0.99-1.05为0.1NNaOH滴定度的修正值；1.4为当量于1mL 0.1N HCI的NH4 +-N的毫克数；V3为反应混合物的总体积(mL)；V4用于分析得滤液体积(mL)；W为称取土样重(g)；T为培养的时间(h)；100为换算为100g的系数。