[发明专利]一种牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法

摘要

本发明公开一种牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法，首先取牙鲆仔稚幼鱼，测量后加入液氮研磨，超声波粉碎，加入乙醚混匀；经离心保存液相，再将固相加PBS缓冲液和乙醚混匀，离心保留液相；然后将液相混匀、静置、分层。分层后的液体放于液氮中快速冷却，回收有机相；水相再加乙醚混合静置、分层，液氮中快速冷却，回收有机相，将其汇集放置在通风橱中，45～55℃水浴，挥发有机相；再用PBS缓冲液溶解，储存于－20℃备用于放射免疫法测定。本发明操作过程简单，结果稳定，可用于牙鲆从仔鱼到6.5cm幼鱼的性激素含量测定的样品制备，也适用于其它鲆鲽鱼类幼鱼甚至其它海水鱼类内分泌激素调控的研究中，其适用范围广泛。

主权项

1、一种牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1)取活的或-80℃保存的牙鲆仔稚幼鱼，秤量后，全鱼用蒸馏水清洗2～3遍，用剪刀剪碎，置于研钵中；2)加入PBS缓冲液浸湿，用液氮充分研磨，匀浆液转入离心管中；然后继续加入PBS缓冲液浸湿，重复研磨，使最终加入的PBS缓冲液量为样品体重数值的8～12倍，收集的匀浆液用超声波粉碎20～40秒钟；3)向匀浆液中加入PBS缓冲液体积1～2倍量的乙醚，翻转混匀，然后在3～5℃下，6000～8000转/分钟离心8～10分钟；4)收集液相，将固相加入4～6倍体积的PBS缓冲液，再加入PBS缓冲液体积0.5～1倍的乙醚，混匀，在3～5℃下，6000～8000转/分钟离心8～10分钟；收集液相，固相重复本步操作；5)将液相汇集在一起，颠倒混匀，然后静置分层，置于液氮中冷冻后取有机相；6)剩余的水相中加入等体积的乙醚，颠倒混匀，静置分层，于液氮中冷冻后取有机相；7)将有机相汇集，置于通风橱，45～55℃水浴，充分挥发有机相；用PBS缓冲液室温下充分溶解，将溶液储存于-20℃待用。