[发明专利]一种急性胰腺炎模型动物胰腺组织RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种急性胰腺炎动物模型的胰腺组织总RNA提取方法，首先制备灌洗液，将其滤膜除菌后于95％O₂、5％CO₂、37℃孵育2小时备用；麻醉急性胰腺炎模型动物，从十二指肠开口处插管至主胰管，注入适量灌洗液；切下胰腺组织，在4℃预冷的大豆胰蛋白酶抑制剂中修剪、涮洗，置于4℃的TRIzol裂解液中匀浆；按TRIzol裂解液试剂盒说明提取胰腺组织总RNA，并以分光光度法测定总RNA的浓度和OD₂₆₀/OD₂₈₀比值，估算其纯度，1％琼脂糖凝胶电泳鉴定其完整性。使用本方法提取的总RNA纯度和完整性可达到实验要求。本发明亦适用于其他疾病动物模型的胰腺组织总RNA提取。

主权项

1、一种从急性胰腺炎动物模型的胰腺组织中提取RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，制备灌洗液，该灌洗液的配制如下：HEPES：25mM，胶原酶IV：40U/ml，大豆胰蛋白酶抑制剂：0.1mg/ml，氯化钠：100mM，氯化钾：5mM，氯化镁：1mM，氯化钙：1mM，D-右旋糖：14mM，谷氨酰胺：2mM，2％(w/v)的牛血清白蛋白，用灭菌生理盐水配制；将所述的灌洗液滤膜除菌后于95％O2、5％CO2、37℃孵育2小时备用；步骤二，麻醉急性胰腺炎模型动物，从十二指肠开口处插管至主胰管，缓慢注入适量的灌洗液；步骤三，切下胰腺，在4℃预冷的大豆胰蛋白酶抑制剂中修剪、涮洗，置于4℃的TRIzol裂解液中匀浆；步骤四，按TRIzol裂解液试剂盒说明书的步骤，提取胰腺组织中的RNA，并以分光光度法测定总RNA的浓度和OD260/OD280比值，估算总RNA的纯度，1％琼脂糖凝胶电泳鉴定其完整性。