[发明专利]一种柳枝稷的体外繁殖方法

摘要

本发明公开了一种柳枝稷的体外繁殖方法。具体为在柳枝稷生长发育至有5～6个节时，切取中间3～4个茎节处，在MBP培养基上人工诱导再生芽；对丛生芽生长点人工重复切除处理4～5次至丛生芽块直径为0.5cm左右，在新的MBP培养基上诱导获得较大规模的丛生芽；将再生植株在生根培养基SMO中培养成苗，移栽至温室或大田。本发明建立的柳枝稷的体外繁殖方法，拓宽了柳枝稷组织培养和遗传转化的基因型范围，缩短了培养周期，提高了再生频率，降低了实验成本，同时可以作为柳枝稷转基因后代快速繁殖的有效手段，为生物技术在柳枝稷上的广泛应用奠定了基础。

主权项

1.一种柳枝稷的体外繁殖方法，其特征在于，该方法按如下步骤进行：步骤一：选择适宜生长发育阶段的茎节组织在柳枝稷生长发育至有5～6个节时，去除顶端和基部的2个茎节，人工切取中间3～4个茎节处的茎节组织，茎节组织包含切取茎节的上下区段各1～1.5cm长度；步骤二：诱导初生再生芽对茎节组织进行灭菌，以MBP培养基人工诱导初生再生芽，其中，MBP培养基为：MS无机盐和维生素混合物4.43g/L，麦芽糖30g/L，6-苄基氨基嘌呤3mg/L，琼脂粉7.5g/L，PH＝5.8，28℃条件下光照培养至再生芽长度为0.5cm～1.5cm；步骤三：丛生芽块生长点的人工处理沿再生芽基部2mm～3mm处切除再生芽，28℃条件下继续光照培养至再生芽长度为0.5cm～1.5cm时，再次切除再生芽，重复进行4～5次，至茎节组织处的丛生芽块直径为0.5cm左右；步骤四：丛生芽的大量诱导再以MBP培养基对丛生芽块进行人工诱导，28℃条件下，光照培养至丛生芽长度平均为2.0cm～2.5cm，再生出较大规模的丛生芽；步骤五：丛生芽生根培养沿丛生芽块基部切取并分离出每个丛生芽，转入生根培养基SMO中，28℃，光照条件下培养2～4星期至每个丛生芽幼苗高度约为5cm以上，得到再生植株；其中，生根培养基SMO为：MS无机盐和维生素混合物2.22g/L、蔗糖8g/L、琼脂粉7.0g/L，pH＝5.8；步骤六：移栽至温室或大田将再生植株炼苗3～5天后，移栽至温室或大田即可