[发明专利]一种检测转基因品系特异性时品系特异性序列的扩增方法

摘要

本发明公开一种在转基因品系特异性检测中扩增基因组品系特异序列方法。该方法将基因组DNA限制酶切，将人工合成的连接头与其相连，分别在连接头上和基因组已知区域设计引物，扩增基因组品系特异序列。本发明通过应用LA PCR技术，使以往扩增效率较低的长链未知区域的扩增变得简单，而且提高了保真性能。该方法还可制备成试剂盒，该试剂盒不必经过繁杂的文库构建及筛选、环化等，就能简单地得到基因组等上的长链目的DNA，并可减少变异点的导入，在转基因品系特异性检测中扩增品系特异性基因片段非常有效。

主权项

1.一种在转基因生物品系特异性检测中扩增基因组品系特异序列方法，首先合成人工接头，分别在连接头上和基因组已知区域设计引物Primer S1、Primer S2，然后将基因组进行酶切，将酶切片段与此连接头连接，取连接产物做模板，以连接头引物和基因特异引物做PCR，步骤如下：1)DNA的限制酶酶切反应：配制限制酶酶切反应液，反应3～5小时，回收DNA，并溶解于蒸馏水；2)配制连接反应液：将步骤1)所得DNA溶液、接头、DNA连接酶、蒸馏水混合进行反应，回收DNA，并溶解于蒸馏水，加热；3)进行1st PCR反应；4)进行2nd PCR反应；5)确认PCR反应产物。