[发明专利]一种高效筛选单酶切基因表达载体的方法无效
| 申请号： | 200710043036.8 | 申请日： | 2007-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN101333536A | 公开（公告）日： | 2008-12-31 |
| 发明（设计）人： | 王海嵘;陈芳源 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属仁济医院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海世贸专利代理有限责任公司 | 代理人： | 严新德 |
| 地址： | 20000*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种高效筛选单酶切基因表达载体的方法，包括一个选择合适载体和限制性内切酶的过程，一个利用限制性内切酶对载体进行酶切的过程，一个选择插入基因片段的过程，一个利用限制性内切酶对基因片段进行单酶切的过程，将单酶切后的载体和单酶切后的基因片段转化感受态细胞，根据理论上连接正确的重组质粒的基因序列为模板，以插入基因片段的载体上的序列设计上游引物，以插入基因片段序列设计下游引物，进行菌落PCR，然后进行电泳，在菌落PCR产物电泳后出现的条带为正确构建的重组载体的菌落。本发明采用单酶切方法构建载体，转化细菌后使用特定设计的引物，进行PCR，根据菌落PCR的结果，直接筛选出正确构建的重组载体，减少了测序费用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 筛选 单酶切 基因 表达 载体 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高效筛选单酶切基因表达载体的方法，所述的方法包括一个选择合适载体和限制性内切酶的过程，还包括一个利用限制性内切酶对载体进行酶切的过程，还包括一个选择插入基因片段的过程，还包括一个利用上述的限制性内切酶对所述的基因片段进行单酶切的过程，其特征在于：将单酶切后的载体和单酶切后的基因片段转化感受态细胞，根据理论上连接正确的重组质粒的基因序列为模板，以插入基因片段的载体的上序列设计上游引物，根据插入基因片段序列设计下游引物，进行菌落PCR，然后进行电泳，在菌落PCR产物电泳后出现的条带为正确构建的重组载体的菌落。
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