[发明专利]水痘减毒活疫苗

摘要

本发明涉及疱疹病毒科的医用微生物，具体为一种水痘减毒活疫苗。本发明通过如下方法制备而成：(1)将MRC－5细胞连续传代；(2)接种至细胞并连续感染；(3)加入培养液；(4)洗涤细胞表面；(5)洗脱感染细胞，离心分离，加入含稳定剂的疫苗液冻存；(6)超声破碎并离心分离得病毒原液；(7)合并稀释，并立即进行分装、冻干，即得到水痘减毒活疫苗。稳定剂是将NaCl、KCl、KH₂PO₄、Na₂HPO₄·12H₂O、蔗糖、谷氨酸钠、卡那霉素、红霉素和去离子水以重量比3∶0.1∶0.2∶3.3∶50∶0.4∶0.1∶0.03∶1000溶于水制得。本发明具有良好的安全性和免疫原性的优点。

主权项

1.一种水痘减毒活疫苗，按如下方法制备而成：(1)将MRC-5细胞在细胞瓶中连续传代不超过33代；(2)至细胞生长至一定规模后，将毒种接种至细胞中，进行两次连续感染，M.O.I分别为0.001～0.002和0.01～0.03；(3)加入含2～3％胎牛血清的MEM培养液，置于35～37℃培养；(4)当MRC-5细胞病变程度达到++～+++时，倒去培养液，以PBS洗液洗涤细胞表面，洗去牛血清；(5)加入0.05％的EDTA溶液洗脱感染细胞，将细胞悬液收集于离心管中，在4～8℃下以1800rpm离心5分钟，弃上清，加入含有稳定剂的疫苗液，混匀，收集，吸样做单瓶无菌检测，-80℃冻存；(6)将单瓶无菌检测合格者，移入超声瓶中进行超声破碎，超声波频率30KHz，0.1～0.2秒/ml，以1000rpm离心10分钟，收集上清，即为病毒原液；(7)将病毒原液合并、稀释成半成品，吸样进行无菌检测，并立即进行分装、冻干，即得到水痘减毒活疫苗。