[发明专利]携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗

摘要

本发明公开了一种携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗，其由包括原核重组表达质粒pGEX－Ag85B的制备、真核重组表达质粒pVAX1－Ag85B的构建以及所述抗结核的减毒伤寒杆菌载体疫苗的制备步骤的方法制得。本发明首次运用了以减毒鼠伤寒杆菌为载体的结核Ag85B疫苗的有效应用研究，开辟了一种新型有效的结核疫苗的途径；与DNA疫苗等相比的优点是，本疫苗能口服，临床实用性强，制备简易、成本低，通常一次免疫即可诱发有效抵抗结核感染的免疫应答，并具有安全、高效、简便和经济等优点。

主权项

1.一种减毒伤寒杆菌载体疫苗，其特征是一种携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗，该疫苗由包括以下步骤的方法制得：(1)原核重组表达质粒pGEX-Ag85B的制备：利用PCR方法对目的基因即Ag85B的BX842578基因序列中的121-975位进行扩增，再提取原核表达质粒pGEX-KG，并经酶切回收及鉴定，获得pGEX-Ag85B；(2)真核重组表达质粒pVAX1-Ag85B的构建：将鉴定成功的原核重组质粒pGEX-KG-Ag85B转化感受态细菌E.coli BL21，经培养、阳性克隆和酶切鉴定后，使含有重组表达质粒的E.coli BL21在LB(Amp+)培养液中培养、接种和诱导培养，再经离心收集菌体及超声碎菌后，提取融合蛋白，然后经纯化和鉴定分析，即得到真核重组表达质粒pVAX1-Ag85B；(3)携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗的制备：将鉴定正确的pVAX-1-Ag85B电转入减毒伤寒杆菌LB5000及SL7207菌株，并通过抗生素阳性克隆筛选及提取质粒酶切鉴定；再经动物攻毒实验检测疫苗的免疫保护效力，即得到所述疫苗。