[发明专利]一种防治蔬菜真菌病害微生物农药的制备方法

摘要

本发明公开了一种防治蔬菜真菌病害微生物农药的制备方法，属于微生物技术领域。该方法利用一种从枸骨组织内分离，筛选出的内生真菌－哈茨木霉菌株L，经过菌种的活化培养；种子液培养；发酵培养；发酵物提取；将所提纯倍半萜类化合物配以农用药物辅料等步骤，制备成多种剂型的农用药物。该微生物农药可用于防治西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄瓜立枯病、菜豆炭疽病和番茄早疫病等蔬菜真菌病害，其防治效果较常规化学药剂略优，且安全，可在蔬菜生产地区推广应用。

主权项

1、一种防治西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄瓜立枯病、菜豆炭疽病和番茄早疫病蔬菜真菌病害微生物农药的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)菌种的活化培养：将分离保存的枸骨内生真菌-哈茨木霉(Trichodermaharzianum Rifai)菌株L，CGMCC No.1780的菌种移至试管内马铃薯葡萄糖培养基(PDA)斜面上，在28℃±1℃条件下，菌种活化培养96h，至试管斜面长满绿色孢子；(2)种子液培养：挑取少量活化培养孢子转接至马铃薯葡萄糖液体培养基，pH自然，每300mL三角瓶装发酵培养液40mL，种子摇床培养温度28℃±1℃，培养时间36h；(3)发酵培养：发酵培养液为每1000mL中含有葡萄糖10g，蔗糖15g，牛肉膏10g，蛋白胨5g，MnCl215mg，CaCO32g，每300mL三角瓶装发酵培养液40mL；配制后121℃灭菌20min，待冷却至40℃在无菌条件下按体积百分含量5％～10％的接种量接种，在28℃±2℃条件下，培养4天；(4)发酵物提取：发酵完毕，收集发酵液，按常规化学方法提取、层析，分离纯化获得倍半萜类化合物Trichothec-9-en-4-ol，12，13-epoxy-，acetate，(4β)-(8CI，9CI)；(5)将纯倍半萜类化合物配以农用药物辅料，制备成多种剂型的农用药物。