[发明专利]副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法，副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒包括：PCR反应液管、样本处理液管、阳性对照管、阴性对照管、标准品管、去离子水管，其2×PCR反应液浓度为两倍稀释，上游引物浓度为10μM，下游引物浓度为10μM，TaqMan探针浓度为3μM，双蒸水各试剂的体积比为：2×PCR反应液∶上游引物∶下游引物∶TaqMan探针＝100∶4∶4∶4∶68；检测方法：为快速检测所有副溶性弧菌，先采集和处理待测标本再进行加样，PCR反应液配制、溶血性弧菌模板制备、标准品与阴性对照、阳性对照模板制备、待测样品标准品、预变性、聚合酶链反应和结果判断，本发明具有定量定性，实时快速简便，特异度好，重复性好，适宜质量控制，防止FQ-PCR产物污染的效果。

主权项

1、一种副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法，其特征在于：所述的副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒由以下试管和各部分组成：(1)、2×PCR反应液：内含2×PCR缓冲液、Taq酶、Mg++、KCl，序列为5/—CAC GCA TTG CGC TCTGAG T—3/的上游引物、序列为5/—CGA GAC ATC CCA GAA CAC AAA—3/的下游引物、序列为5/—FAM—TCG GGC GTC TGG TGC TGA—TAMRA—3/的TaqMan探针、去离子水。(2)、DNA提取剂：内含0.9％NaCl和0.1％二硫基乙醇；(3)、阳性对照管：内含副溶血性弧菌TLH基因；(4)、阴性对照管：不含副溶血性弧菌TLH基因；(5)、标准品管：病毒拷贝数浓度：2×107cfu/ml、2×106cfu/ml、2×105cfu/ml、2×104cfu/ml；(6)、去离子水管：管内试剂为去离子水，即为无菌双蒸水；所述的检测方法，是副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒用于快速检测所有副溶性弧菌的方法，该检测方法由下列步骤组成：(1)、每份PCR反应液的配制；(2)、溶血性弧菌模板制备；(3)、标准品与阴性对照，阳性对照模板制备的各步骤与溶血性弧菌模板制备相同；(4)、待测样品、标准品；(5)、预变性；(6)、聚合酶链反应，也称为基因扩增；(7)、结果判断。