[发明专利]农杆菌介导的花椒转基因方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌介导的花椒转基因方法，包括下列步骤：(1)将带腋芽幼嫩茎段及茎尖接种于诱导培养基中，以萌发20天腋芽的叶柄及茎段作为浸染外植体；(2)将农杆菌单菌落，用牙签挑取，加入到YEP液体培养基中培养震荡培养，直到OD值达到0.4－0.7，离心收集菌体，用WPM重悬培养基重悬制得农杆菌菌液；(3)将叶柄及茎段切成0.5cm左右的外植体，接种到诱导培养基于黑暗中预培养，培养时间48－72h，投入步骤b农杆菌菌液中，使外植体与农杆菌充分接触，取出外植体，转入共培养基上培养48－72h，然后转入筛选培养基中诱导芽再生，最后将材料接种到生根培养基中诱导生根。本发明能培育抗病虫、抗低温、抗干旱，高精油含量、高药用价值及无刺的转基因花椒。

主权项

1.一种农杆菌介导的花椒转基因方法，包括下列步骤：(1)将带腋芽幼嫩茎段及茎尖接种于诱导培养基中，以萌发20天腋芽的叶柄及茎段作为浸染外植体；(2)将农杆菌单菌落，用牙签挑取，加入到YEP液体培养基中培养震荡培养，直到OD值达到0.4-0.7，离心收集菌体，用WPM重悬培养基重悬制得农杆菌菌液；(3)将叶柄及茎段切成0.5cm左右的外植体，接种到诱导培养基于黑暗中预培养，培养时间48-72h，投入步骤b农杆菌菌液中，使外植体与农杆菌充分接触，取出外植体，转入共培养基上培养48-72h，然后转入筛选培养基中诱导芽再生，最后将材料接种到生根培养基中诱导生根。