[发明专利]桑寄生抗肝癌BEL－7402蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及一种桑寄生植物中草药中抗肝癌BEL－7402蛋白的提取或制备方法，属生有分离纯化工艺方法技术领域。本发明方法的特征在于具有以下工艺步骤：(1)将中草药桑寄生粉碎，用氯化钠溶液浸提12～24小时，抽滤混合物得滤液；(2)滤液中加入硫酸铵固体调至饱和度70％，离心分离得沉淀物粗品蛋白；(3)将粗品蛋白以水溶解、超滤，滤液上层析柱得蛋白活性组分，然后冷冻干燥，得纯化后的桑寄生蛋白。由MTT法检测肝癌细胞BEL－7402生长抑制实验结果表明，桑寄生蛋白对肝癌细胞BEL－7402生长抑制作用较为显著。

主权项

1.一种桑寄生抗肝癌BEL-7402蛋白制备方法，其特征在于具有以下工艺过程和步骤：a.桑寄生粗品蛋白的制备：将干燥的中草药桑寄生粉碎成200目粉末，用0.1～0.3mol/L氯化钠溶液在4℃下浸提12～24小时，浸提液用布氏漏斗过滤，得滤液；在滤液中加入硫酸铵固体，调至饱和度为60～80％，随后在4℃下静置过夜；然后用离心分离机在6000rpm转速下低温离心分离20分钟，得沉淀物粗品蛋白CLP；b.粗品蛋白的分子筛层析纯化：将上述所得的粗品蛋白CLP用去离子水溶解，并用Tris-HCI缓冲液透析，随后用孔径为0.45μ滤膜超滤；滤液上SephadexG100分子筛层析柱，用0.05mol/L Tris-HCI缓冲液洗脱，流速为1毫升/分钟，每5分钟收集1管，分部收集；检测蛋白质含量后，合并收集管得二部分有效组分；然后冷冻干燥，得二部分分子筛凝胶层析产品，即为纯化后的桑生蛋白。