[发明专利]采集扇贝高浓度精液的方法

摘要

一种采集扇贝高浓度精液的方法，它的方法包括：优质亲贝的培育、制备吸取精液的吸头、高浓度精液的采集、检测收集精子的活力。该方法是采用截去尖端的200μL吸头在性腺充分成熟的扇贝肾孔端附近扎破肾管并吸取精液，所获得的精液仅含有少量组织残迹和生理组分，精液浓度高，为0.2－1.6×10⁹个/mL；成熟度高，达100％，其接触海水的量非常少，因而没有完全被激活。8－9cm的雄性虾夷扇贝，可收集到约1.5mL精液/只；6－7cm的雄性栉孔扇贝，可收集到约0.6mL精液/只。通过精子冷冻保存和授精试验验证，采用这种精液收集方式所收集的扇贝精液可应用于生产和研究当中。

主权项

1.一种采集扇贝高浓度精液的方法，其特征在于它的方法包括：1)、优质亲贝的培育；2)、制备吸取精液的吸头；3)、高浓度精液的采集；4)、检测收集精子的活力。1)、优质亲贝的培育：以壳高为标准，从养殖海区选择生长速度快，健康活泼的雄性扇贝进行暂养；虾夷扇贝壳高9～11cm，暂养密度每立方米水体20个，暂养水温4～8℃；栉孔扇贝壳高6～7cm，暂养密度每立方米水体80个，暂养水温14～16℃；投喂硅藻、金藻及螺旋藻，每天倒池一次；2)、制备吸取精液的吸头：材料为200μL黄颜色的吸头，吸头尖端用锋利的刀片略微倾斜削去0.5-1cm，并修平整毛边；3)、高浓度精液的采集：待亲贝性腺充分成熟、个别出现排精现象时，挑选性腺饱满的雄贝，阴干升温刺激使其排放精子，观察到排精后，立即从海水中取出，用制备的200μl吸头，在肾孔端附近扎破肾管并吸取精液，放入冰上预冷的Eppendorf管中备用；4)、检测所收集精子的活力：取5μl精液，用195μl海水稀释40倍，将计数板放于显微镜的载物台上，盖上盖玻片；迅速取一滴稀释的精液于血球计数板盖玻片的边缘使精液自动均匀渗进计数室；置于200倍或400倍显微镜下观察精子活动情况，借助计数板上的标准网格进行目测计数，观察精子浓度及各活动类型的精子数目，评价精子活力是根据精子活动类型其前进运动精子数的多少及其占全部精子数的百分比来确定，即所测精子的活力达到80-100％；