[发明专利]半滑舌鳎人工催产和雌核发育二倍体鱼苗的诱导方法

摘要

一种半滑舌鳎人工催产和雌核发育二倍体鱼苗的诱导方法，包括：亲鱼人工催产、精子的遗传失活、雌核发育二倍体鱼苗的诱导及鉴定方法。本发明首次建立了半滑舌鳎人工催产获得批量化未受精卵的方法，首次建立了采用半滑舌鳎精子和花鲈精子诱导半滑舌鳎卵子雌核发育获得雌核发育二倍体鱼苗的方法，筛选到人工催产有效的激素种类和剂量，筛选到适合半滑舌鳎卵雌核发育的冷休克起始时间、冷休克温度和时间，建立了半滑舌鳎雌核发育鱼苗的鉴定方法。本方法获得半滑舌鳎卵的受精率为60－89％，孵化率为34－79％，雌核发育鱼苗诱导率为0.4－6.3％；本发明具有先进、高效、实用、可靠的特点，在半滑舌鳎苗种繁育、性别控制和全雌育种上具有重大应用价值和广阔的推广应用前景。

主权项

1.一种半滑舌鳎亲鱼人工催产和授精方法，其特征在于他的方法包括：(1)亲鱼的选择；(2)催产激素的选择和剂量；(3)人工催产及人工授精；(1).亲鱼的选择方法：半滑舌鳎亲鱼为3龄雌鱼和2龄雄鱼，在催产前2-3个月进行控温控光；在此期间，水温按每10天升高0.5-1℃，从17-19℃逐步升高到22-23℃，并维持在此温度；光照时间按每10天延长1小时，由每天8小时逐渐延长到16小时，并维持在16小时；通过观察和手摸检查选择性腺明显隆起、用手轻压性腺上下两侧有明显的充实感且性腺前端有一定的柔软度的雌鱼，用于注射激素进行人工催产；雄性亲鱼要选择轻挤性腺部位，看到精液流出者方可用于催产；(2)、催产激素的选择和剂量：半滑舌鳎对几种催产激素较为敏感，如绒毛膜促性腺激素HCG、促黄体素释放激素类似物A2和A3以及地欧酮DOM，其中如下几种激素及其剂量催产效果较好：LRH-A2的适宜剂量为：雌鱼0.5-2.0μg/kg，雄鱼3-6μg/kg；LRH-A3的适宜剂量为：雌鱼0.4-2.0μg/kg，雄鱼2-5μg/kg；HCG+LRH-A3的适宜剂量为：雌鱼HCG40-60 IU+LRH-A3 0.4-1.5μg/kg；LRH-A3+DOM的适宜剂量为：雌鱼LRH-A3 0.4-2.0μg/kg+DOM 1-2mg/kg；(3).人工催产及人工授精：技术内容包括：A、激素注射；B、效应时间确定；C、人工挤卵和授精；A、激素注射：选好亲鱼后，按催产剂量进行激素注射；注射时用MS-222进行麻醉或直接注射，亲鱼从水中捞起后，迅速用大毛巾包住，以防其受伤；激素溶液的注射量雌鱼不要超过1ml/每尾，雄鱼不要超过0.2ml/每尾，注射部位为侧线上方头部后方的肌肉较厚部分，进针角度不要超过45°，雄鱼注射时不要穿透鱼体；B、效应时间确定：激素种类不同，注射后的效应时间也不同，各种激素22-23℃时的效应时间如下：LRH-A2：36-44h；LRH-A3：35-43h；HCG+LRH-A3：34-42；LRH-A3+DOM：35-43h；C、人工挤卵和授精：到达效应时间以后，当雌鱼性腺明显由硬变软，感觉性腺内的卵有明显的流动感时，即进行挤卵和人工授精；用手在性腺上下两侧从后到前轻压性腺部位，将卵挤出，接在烧杯中；采精时，用手挤压雄鱼腹部，挤出的精液用吸管吸到2-5毫升的小瓶中备用；当进行生产性授精时，每条雌鱼产出的卵约100-300毫升，可用2-3条雄鱼的精液约1-2毫升授精；将精卵混合均匀，加入两倍于卵体积的海水，2-3分钟后，再加入5-8倍于卵体积的海水完成受精过程，20min后洗去过多的精液即可转入孵化缸进行孵化；