[发明专利]裸子植物花粉管微管骨架的免疫荧光标记方法及其应用

摘要

本发明公开了一种裸子植物花粉管微管骨架的免疫荧光标记方法及其应用。该方法包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管用浓度为3－5g多聚甲醛/100ml 40－60mM Pipes缓冲液的固定液固定40－60min；2)洗涤花粉管；3)将花粉管置于浓度为0.5－1.2g果胶酶和纤维素酶/100ml水的酶溶液中，在20－30℃下酶解30－40min；4)洗涤花粉管；5)将花粉管置于体积/体积百分比浓度为0.5－1％的Triton X－100中渗透1－3h；6)洗涤花粉管；7)加入作为一抗的抗β－tubulin单克隆抗体孵育1－3h；8)洗涤花粉管；9)加入与一抗特异结合的荧光标记的二抗避光孵育1－3h，微管骨架被免疫荧光标记。本发明将在裸子植物花粉管细胞骨架的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。

主权项

1、一种对裸子植物花粉管微管骨架进行免疫荧光标记的方法，包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管用浓度为3-5g多聚甲醛/100ml 40-60mM Pipes缓冲液的固定液固定40-60min；2)洗涤花粉管；3)将花粉管置于浓度为0.5-1.2g果胶酶和纤维素酶/100ml水的酶溶液中，在20-30℃下酶解30-40min；4)洗涤花粉管；5)将花粉管置于体积/体积百分比浓度为0.5-1％的Triton X-100中渗透1-3h；6)洗涤花粉管；7)加入作为一抗的抗β-tubulin单克隆抗体孵育1-3h；8)洗涤花粉管；9)加入与一抗特异结合的荧光标记的二抗避光孵育1-3h，微管骨架被免疫荧光标记。