[发明专利]一种提高萝卜游离小孢子培养成胚率的方法

摘要

本发明公开了一种提高萝卜游离小孢子培养成胚率的方法，属于植物育种技术领域。该方法包括如下步骤：(1)灭菌；(2)花药预处理；(3)分离小孢子；(4)小孢子培养。发明的优点是：本方法在进行萝卜小孢子培养之前，将花药离体，并在合适的培养基上进行低温预处理，这种预处理对萝卜小孢子培养产生两方面的影响：①使未成胚的萝卜品种产生了胚状体；②使成胚萝卜品种的成胚率有所提高，从16.0个/10⁵个小孢子提高到40.0个/10⁵个小孢子，提高了2.5倍。利用该方法进行中国萝卜游离小孢子培养，可获得较高的频率的胚状体，解决了中国萝卜游离小孢子培养胚状体再生的难题。

主权项

1.一种提高萝卜游离小孢子培养成胚率的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)灭菌：花蕾用60-80％酒精灭菌20-40秒，再用含1-3％有效氯离子的次氯酸钠溶液灭菌10-20分钟；在用无菌水冲洗2-4次，每次2-6分钟；(2)花药预处理：在无菌条件下取出花药，接种在B5-13(含13％蔗糖，添加甘露醇浓度15g/L)培养基上，每培养皿中接种30个花药；将接种后的花药在4℃低温条件下低温培养2-4天；(3)分离小孢子：将低温处理后的花药，在无菌条件下分别取出，在研钵中用研棒轻轻挤压花药使小孢子游离出来，经400目尼龙网过滤后收集在10ml的离心管中，用B5-13培养基洗涤2-4次，每次2-4分钟；(4)小孢子培养：将小孢子在1/2NLN液体培养基中培养，用血球计数板将小孢子终浓度调整为1～2×105个/ml，25℃暗培养10-20天；培养中的小孢子经32-35℃热激24小时后，于25℃进行暗培养，直至长出胚状体。