[发明专利]一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法

摘要

一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法，属于生物制品加工技术领域。本发明方法的具体步骤为：a.将谷胱甘肽酵母发酵液，采用过滤和超滤处理去除菌体、蛋白质和多糖等杂质；b.将超滤后的发酵液通过活性炭脱色；c.将脱色后的谷胱甘肽发酵液通过50℃真空减压浓缩至原体积的20％、降温至10℃结晶除盐得发酵液粗提物，谷胱甘肽浓度约为5％－40％；d.采用装填有阳离子交换树脂的模拟移动床分离纯化谷胱甘肽发酵液粗提物，得到谷胱甘肽纯化液。本发明利用溶液中目标产物与共存杂质之间在物理、化学以及生物学性质的差异，通过模拟移动床实现谷胱甘肽分离纯化的目的，产品纯度可达99％以上、收率达70％以上。

主权项

1.一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法，其特征是步骤为：a、将谷胱甘肽酵母发酵液，采用过滤和超滤处理去除菌体、蛋白质和多糖杂质；b、将超滤后的发酵液通过活性炭脱色；c、将脱色后的谷胱甘肽发酵液通过50℃真空减压浓缩至原体积的20％、降温至10℃结晶除盐得发酵液粗提物，控制谷胱甘肽质量浓度为5％-40％；d、采用装填有阳离子交换树脂的五区模拟移动床分离纯化谷胱甘肽发酵液粗提物；五区模拟移动床，各区初始时刻命名为区0、区I、区II、区III、区IV，每一切换时刻就周期性轮换一次，依次变换为区I、区II、区III、区IV，区0，每个区由1-4根固定床离子交换柱组成，其中，区0位于洗脱液入口1与提取液出口2处之间，在区0内实现发酵液中杂质的解吸；区I位于洗脱液入口2与提取液出口1处之间，在区I内实现发酵液中谷胱甘肽的纯化；区II位于提取液出口1与进样口之间，在区II内使发酵液中的杂质反复吸附、解吸而浓缩；区III位于进样口与提余液出口之间，在区III内使弱吸附杂质得以分离；区IV主要作用是洗脱液被净化后与新鲜的洗脱液一起进入区0，可循环利用；另一方面将区IV与区0隔开，防止提余液中的组份进入区0而污染；采用0.1-0.5M NaOH水溶液作为洗脱液，控制模拟移动床各功能区的流动相洗脱液流速和柱切换时间，将谷胱甘肽和杂质分离，从提取液出口2处收集得到谷胱甘肽纯化液，从提取液出口1和提余液出口处得到杂质；洗脱液流量100-600ml/min，进样流量20-200ml/min，提取液和提余液流速通过针阀调节压力来控制，阀切换时间为5-30min；整个模拟移动床的温度为20-70℃，进样液、洗脱液温度20-70℃，二者温度保持一致。