[发明专利]银杏愈伤组织或悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种银杏愈伤组织或悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶源的获得、愈伤组织诱导及继代培养、悬浮细胞培养、愈伤组织或悬浮细胞中产生黄酮类化合物等步骤，本发明方法所制备的银杏愈伤组织或悬浮细胞中有较高含量的银杏黄酮类化合物。本发明方法利用稀土、水杨酸等诱导子对银杏愈伤组织或悬浮细胞的培养和黄酮的生产进行有目的的调控，可以在短期内获得大量的制药原料，并能有效降低生产成本。

主权项

1.一种银杏愈伤组织或银杏悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶源的获得、愈伤组织诱导及继代培养、悬浮细胞培养等步骤，其主要步骤如下：(1)、按照常规植物组织培养的芽或叶片增殖的方法，获得无菌的银杏芽苗或叶片；(2)、将步骤(1)所获得的银杏无菌芽苗或叶片接种到愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，初代培养后连续继代5～6次，获得松散的银杏愈伤组织；(3)、将步骤(2)所获得的银杏愈伤组织接种在含有NAA和KT的MS液体培养基中振荡培养，继代培养2次，得液体悬浮培养细胞；(4)、将步骤(3)所得到的液体悬浮培养细胞接种在下述任意一种液体培养基中进行振荡培养：(a)MS液体培养基+NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L+稀土0.5～5mg/L，或(b)MS液体培养基+NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L+水杨酸0.5～5mg/L；收集细胞培养物，得银杏悬浮细胞；或将步骤(2)中所获得的银杏愈伤组织继代在下述任意一种固体培养基上培养：(a)MS固体培养基+NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L+稀土0.5～5mg/L，或(b)MS固体培养基+NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L+水杨酸0.5～5mg/L，收获愈伤组织培养物，得银杏愈伤组织。