[发明专利]一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法

摘要

本发明采用优化的蛋白提取方法，通过十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶(SDS－PAGE)电泳技术检测啤酒大麦和麦芽中泡沫蛋白的组分与含量，能够准确直观的检测到啤酒大麦和麦芽在发芽过程中泡沫蛋白各组分及其含量的变化情况。

主权项

1.一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于按以下步骤进行操作：(1)取大麦或麦芽1g，粉碎，以4℃提取缓冲液3ml提取1h，2800×g离心10min，将所得上清液收集至另一离心管中，再次向沉淀中加入3ml的4℃提取缓冲液，4℃提取1h，2800×g离心10min，合并两次所得上清液，沸水浴放置20min，4000×g离心10min，取上清液，即得蛋白溶液A；(2)通过考马斯亮蓝定量蛋白法(Bradford法)绘制标准曲线，测定蛋白溶液A的总蛋白含量；(3)吸取相当于14μg总蛋白的蛋白溶液A于微量离心管(eppendorf管)中，加入1/4样品体积的样品缓冲液，置沸水浴5min，1000×g离心3min后，以5％丙烯酰胺溶液为浓缩胶，12％丙烯酰胺溶液为分离胶，使用三(羟甲基)氨基甲烷/甘氨酸不连续系统(Laemmli系统)进行电泳，电泳结束后将凝胶浸入染色液染色1～2小时，然后用脱色液浸泡至背景清晰明亮，为凝胶拍照，使用凝胶分析软件对条带进行定量分析；以上所述：提取缓冲液为pH7.5，其中含有50mmol·L-1三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，10mmol·L-1氯化钠，1mmol·L-1二硫苏糖醇，1mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠，余量为水；样品缓冲液为pH6.8，含有三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)0.2mol/L，10％十二烷基磺酸钠(W/V)，5％2-巯基乙醇(V/V)，20％甘油(V/V)，0.05％溴酚蓝(W/V)，余量为水；电泳缓冲液为pH8.3，含有Tris 0.25mol/L，甘氨酸1.92mol/L，0.5％SDS(W/V)，余量为水，使用前稀释五倍；染色液中含有考马斯亮蓝R250 0.05％(W/V)，甲醇50％(V/V)，冰醋酸10％(V/V)，余量为水。脱色液中含有甲醇5％(V/V)；冰醋酸7％(V/V)，余量为水。