[发明专利]苎麻高效遗传转化的方法

摘要

本发明公开了一种构建苎麻遗传转化体系的方法，属于农业生物技术领域或植物基因工程领域。主要步骤包括取苎麻实生苗子叶作为转化外植体与农杆菌共培养，然后把经过共培养的子叶挑出，转入到选择培养基上进行脱菌和选择培养，将选择培养基中产生的抗性植株转入到选择伸长培养基和选择生根培养基中先后进行伸长培养、生根培养，直至抗性芽再生为完整的植株。对获得的抗性植株分别进行了GUS检测、PCR检测和Southern杂交检测，结果表明外源基因已经整合到苎麻的基因组中。本发明具有操作简单、取材方便、转化效率高，可广泛用于苎麻的基因工程操作中。

主权项

1、一种适用于苎麻遗传转化的方法，包含农杆菌介导的转化步骤，其特征在于，取苎麻的实生苗的子叶与农杆菌共培养，然后将共培养后的子叶挑出，转入到选择培养基上脱菌和选择培养，将选择培养基中产生的抗性芽分别转入芽伸长培养基和生根培养基中进行芽伸长培养和诱导根的形成，直至抗性芽再生为完整的候选转化植株，采用GUS、PCR和Southern方法对获得的候选转化植株进行检测，得到苎麻转化植株，其具体步骤如下：1)将灭菌后的苎麻种子接种于1/2MS基本培养基上，在光照为3000lux和25～28℃条件下使种子萌发，取萌发4天后的实生苗的子叶作为转化用的外植体；2)将步骤1)的子叶浸泡在OD值为0.25～1.5的农杆菌菌液中5～10分钟，并将该子叶置于共培养培养基上培养，该共培养培养基的组分为MS基本培养基附加0.5mg/L噻苯隆、0.01mg/L吲哚乙酸、0～200mg/L乙酰丁香酮、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.6～6.0，培养的温度为15～28℃，培养时间为1～4天，在3000lux下光照培养或暗培养；3)将步骤2)共培养1～4天后的子叶转入到选择培养基上培养，该选择培养基组分如下：MS基本培养基附加0.5mg/L噻苯隆、0.01mg/L吲哚乙酸、25mg/L卡那霉素、500mg/L头孢霉素、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.8；4)将步骤3)的子叶转移到步骤3)所述的选择培养基上培养，培养温度为25±3℃，培养时间6～8周，至抗性再生芽产生；5)将步骤4)的抗性再生芽转入MS基本培养基附加1.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、25mg/L乙酰丁香酮、250mg/L头孢霉素、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉的伸长培养基上，培养至芽伸长约2厘米时将其转入到生根培养基上诱导生根，生根培养基组分如下：1/2MS基本培养基附加0～0.5mg/L萘乙酸、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.8，培养约2周后得到候选转化植株；6)采用GUS、PCR和Southern方法对步骤5)的候选植株进行检测，得到苎麻转化植株。