[发明专利]一种基于硝酸纤维素膜的植酸酶高通量筛选体系无效
| 申请号： | 200710173381.3 | 申请日： | 2007-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN101469343A | 公开（公告）日： | 2009-07-01 |
| 发明（设计）人： | 姚泉洪;熊爱生;彭日荷;高峰;付晓燕;薛永;李贤;田永生;赵伟 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/44 | 分类号： | C12Q1/44;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 | 代理人： | 汪克臻;费开逵 |
| 地址： | 201106上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于硝酸纤维素膜的植酸酶高通量筛选体系。该体系中经过体外定向分子进化或化学诱变得到的植酸酶突变库，涂布于固体培养基上，通过硝酸纤维素膜影印后进行显色筛选，该方法能够获得比试管培养更大的筛选能力，能够在短时间内进行大量的植酸酶突变库筛选。通过该基于硝酸纤维素膜的植酸酶高通量筛选体系，开展植酸酶突变和高通量筛选，可以较大幅度的提高植酸酶的突变筛选效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 硝酸纤维素膜 植酸酶高 通量 筛选 体系 | ||
【主权项】：
1. 一种基于硝酸纤维素膜的植酸酶高通量筛选体系，包括下列步骤：(1)获得植酸酶U59804突变基因：通过引物U59804Z1：aaggatccatggtgactctgactttcctgctttcg和U59804F1：tgaactaaagcactctccccag从烟熏曲霉cDNA中扩增得到植酸酶U59804基因，回收的植酸酶基因的DNA片段用DNA酶进行降解，回收的降解产物进行无引物PCR扩增，再以无引物扩增产物为模板加入引物U59804Z1和U59804F1，进行PCR扩增获得植酸酶U59804突变基因；(2)上述获得的植酸酶U59804突变基因，经BamHI和SacI双酶切后，植入含氨苄青霉素抗性基因的载体pYPX251中，获得带庆大霉素抗性基因原核启动子及t1t2终止子的植酸酶U59804突变基因原核表达载体质粒，再经电击将质粒转入宿主菌大肠杆菌DH5α中，在氨苄青霉素的固体培养基上培养得转化子；(3)上述长出的U59804突变基因的大肠杆菌转化子，影印至硝酸纤维素膜上，以植酸钾为底物进行高通量筛选；(4)用钼蓝法测定方法测植酸酶酶活性。
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