[发明专利]一种预防仔猪腹泻疫苗的制备方法无效
| 申请号： | 200710185287.X | 申请日： | 2007-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN101249260A | 公开（公告）日： | 2008-08-27 |
| 发明（设计）人： | 赵宝华;宋杰;钱明明 | 申请（专利权）人： | 河北师范大学 |
| 主分类号： | A61K39/108 | 分类号： | A61K39/108;A61P31/04;A61P1/12;C12N15/09;C12N15/63;A61K36/815 |
| 代理公司： | 石家庄科诚专利事务所 | 代理人： | 刘谟培 |
| 地址： | 050016河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 一种预防仔猪腹泻疫苗的制备方法，包括以下步骤：(1)从发病猪体内分离得到产肠毒素型大肠杆菌；(2)以该致病菌为对象，PCR扩增得到ST1和LTB基因，利用定点突变技术对ST1分子进行突变后与LTB基因融合，定向克隆于表达载体pET－28b中；(3)将产气荚膜梭菌的α－β毒素保护性抗原基因构建到ST1－LTB基因下游，得到了重组质粒pBETST3LTBαβ，在大肠杆菌中成功表达；(4)将构建的基因工程菌株BL21(DE3)(pBETST3LTBαβ)灭活后的菌悬液按质量比7∶3辅以浓度为10g/l的中草药汤剂即可。该疫苗可在母猪体内产生良好的免疫原性，抗体通过胎盘传递给仔猪，使仔猪得到较高的保护率。该方法无毒害、无残留，对免疫动物无任何伤害，为防治仔猪泻提供了新的治疗途径。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 预防 仔猪 腹泻 疫苗 制备 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种预防仔猪腹泻疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)从发病猪体内分离得到产肠毒素型大肠杆菌致病菌；(2)以分离的致病菌为研究对象，PCR扩增得到ST1和LTB基因，利用定点突变技术将形成ST1分子内二硫键的半胱氨酸碱基进行突变，将突变的ST1基因与LTB基因融合，定向克隆于原核表达载体pET-28b中，得到重组质粒pBETST3LTB；(3)将产气荚膜梭菌的α-β毒素保护性抗原基因通过分子生物学手段构建到ST1-LTB基因下游，得到重组质粒pBETST3LTBαβ，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达；(4)将构建的基因工程菌株BL21(DE3)(pBETST3LTBαβ)灭活后的菌悬液按质量比7∶3辅以浓度为10g/L的中草药制剂即可。
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