[发明专利]以切割反应检测核酸的方法和组合物

摘要

本发明提供了产生指示样品中靶核酸序列存在的信号的方法、组合物和试剂盒，包括以上游和下游寡核苷酸温育包含靶核酸序列的样品形成切割结构和以核酸酶切割该切割结构产生信号。可检测信号的存在指示靶核酸序列和非侵入切割结构的存在。

主权项

一种检测靶核酸的方法，其包括：(a)提供：靶核酸，其从3′到5′方向包含第一区域和第二区域，模板核酸，其从3′到5′方向包含第一区域和第二区域，与所述靶核酸的所述第一区域至少部分互补的第一寡核苷酸，包含5′区域和3′区域的第二寡核苷酸，其中所述3′区域与所述靶核酸的所述第二区域互补，且其中所述5′区域不与所述靶核酸互补，但与所述模板核酸的所述第一区域至少部分互补，包含5′区域和3′区域的第三寡核苷酸，其中所述3′区域与所述模板核酸的所述第二区域至少部分互补，且所述5′区域不与所述模板核酸互补，切割剂，以及聚合剂；(b)在反应条件下混合所述靶核酸、所述模板核酸、所述第一寡核苷酸、所述第二寡核苷酸、所述第三寡核苷酸、所述切割剂和所述聚合剂，其中所述反应条件允许：所述靶核酸与所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷酸中的每一个形成双链体，其中所述第二寡核苷酸的5′区域形成第一切割结构的第一活瓣，以所述切割剂切割所述第一活瓣，从而允许释放第一活瓣，以所述释放的第一活瓣、所述模板核酸和所述第三寡核苷酸形成第二双链体，其中所述第三寡核苷酸的5’区域形成第二切割结构的第二活瓣，以及以所述切割剂切割所述第二活瓣；以及(c)检测所述第二活瓣切割所产生的信号，其中仅当形成所述第一双链体时所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷酸至少被切口分开时，方产生所述信号。