[发明专利]从大肠杆菌BL21CCM7394中无色菌CCM4824制备固定重组青霉素酰化酶催化剂的方法及其在合成β-内酰胺抗生素中的应用

摘要

本发明公开一种从大肠杆菌BL21CCM7394重组菌株表达的无色菌CCM4824所得的独立青霉素酰化酶(PA)，关系到pKXIPl的重组质体，以及青霉素酰化酶作为生物催化剂用于工业合成抗生素的过程。更具体的，本发明公开一种用反应混合物合成半合成β-内酰胺抗生素的方法，反应混合物由活性酰基原料(用于阿莫西林和头孢羟氨苄的D-对羟基苯甘酸甲酯或氨基化合物；用于氨比西林的头孢氨苄的D-苯甘氨酸甲酯或氨基化合物)和亲核试剂(6-APA或7-ADCD)组成，由从重组大肠杆菌BL21CCM7394所得的青霉素酰化酶作为生物催化剂催化。

主权项

一种利用青霉素酰化酶作为生物催化剂合成β-内酰胺抗生素的方法，其中所述的青霉素酰化酶生物催化剂是来自于在大肠杆菌BL21CCM7394中表达的无色菌CCM4824，在其特征在于包括：f、利用溶剂和化学清洁剂或金属螯合物来增加细胞通的透性，从而以化学方法提取青霉素酰化酶；g、用分级沉淀和层析对可溶性酶进行纯化；h、在-2到2℃的温度下，利用比率范围为15∶1到20∶1的丙烯酰胺和N，N’-二甲基乙二胺对上述酶进行固定化；i、通过与戊二醛交联稳定固定化酶，以获得粒子尺寸在100到300微米的粗粒子，优选的粒子尺寸为150到250微米之间；j、利用上述固定青霉素酰化酶催化酰化带有活性酰基原料的亲核试剂，以获得具有较高产量和纯度的β-内酰胺抗生素。