[发明专利]重组胎盘生长因子的表达生产、分离纯化及其化学标记

摘要

本发明属于生物技术领域-重组基因工程领域。胎盘生长因子(placental growth factor，PLGF)在血管新生或增生中起着重要作用；但体内天然的PLGF含量低且半衰期短，故很难提取到足够量的内源PLGF蛋白以满足日益增长的实验研究及临床需要。本发明公开了一种以重组基因工程，细胞培养技术在体外高效表达生产重组PLGF的系统及以层析分离技术从表达的上清液中提取纯化PLGF蛋白的方法。本发明还公开了一种对纯化的PLGF蛋白进行体外非放射性化学偶联标记处理的方法。本发明的PLGF蛋白(包括未标记的或化学偶联标记的)在实验研究及临床诊疗上具有广泛的用途。

主权项

1. 一种以重组基因工程、细胞培养及层析技术来表达及分离提取重组胎盘生长因子(placental growth factor，PLGF)蛋白的系统方法，其特征在于其包括下列步骤：1)以多聚酶链式反应(RT-PCR)从细胞或组织中克隆获得含编码PLGF蛋白的cDNA；2)扩增获得的cDNA经限制性内切酶处理后，再用T4连接酶将其与经相应的限制性内切酶处理的表达载体相连，获得重组表达载体；3)将上述重组表达载体转入真核宿主细胞，经筛选、扩增及诱导培养后获得高效稳定分泌表达重组PLGF蛋白的宿主细胞；4)收集表达宿主细胞培养上清液，经离心及滤膜过滤后，将滤液上样至离子交换层析柱中；5)层析柱先经洗脱液清洗后，再以回收洗脱液洗脱并收集洗脱下的蛋白；6)收集洗脱的蛋白再经调节pH至中性及透析与理化鉴定后，即获得纯化的重组PLGF蛋白。