[发明专利]一种甲基对氧磷的酶联免疫检测方法

摘要

一种甲基对氧磷的酶联免疫检测方法，属于免疫分析技术领域。本发明利用合成的甲基对氧磷免疫原免疫获得到多克隆抗体，以甲基对氧磷为标准品，以甲基对氧磷半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立了纺织品(棉花)中甲基对氧磷的间接竞争酶联免疫分析方法。本发明建立了纺织品中甲基对氧磷农药代谢物的间接ELISA方法，为甲基对氧磷在纺织品中的残留检测提供了快速高效的检测手段，由于采用的是多克隆抗体，费用较低并且稳定性和重复性较好。灵敏度为0.01ppm，线性范围为0.1－20ppm。免疫反应的高特异性和亲和性使ELISA具有极高的选择性和灵敏度。

主权项

1、一种甲基对氧磷的酶联免疫检测方法，其特征在于步骤如下：(1)抗原的包被以半抗原O，O-二甲基-O-(4-丙酸基苯基)磷酸酯与卵清蛋白OVA的偶联复合物作为包被抗原，以0.05M、pH 9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释包被抗原1∶32000～1∶64000，浓度为0.625～1.25μg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加入100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液作为封闭液，封闭2h；(2)竞争反应将免疫制备的甲基对氧磷多克隆抗体用抗体稀释液：含0.1％明胶、含0.05％吐温-20、pH 7.4、0.01M的磷酸盐缓冲溶液PBST，按1∶2000～1∶4000比例稀释后，加入酶标板中，每孔加50μL，同时每孔分别加入标准品稀释液PBST稀释的0.01μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL系列浓度之一的甲基对氧磷标准品50μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)加酶标二抗加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP，以抗体稀释液稀释为1∶5000，每孔加100μL，37℃温育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)显色每孔加入100μL显色液，暗处37℃反应15min，取出后每孔加入100μL、2mol/L的硫酸终止液，用酶标仪测定吸光值A450，与所作的标准曲线对比算出待测样品的甲基对氧磷浓度。