[发明专利]一种提高2－酮基－L－古龙酸发酵生产稳定性的方法

摘要

一种提高2－酮基－L－古龙酸发酵生产稳定性的方法，属于生物工程技术领域。2－酮基－L－古龙酸KGA又称维生素C，本发明用三种混合液代替玉米浆，采用正交试验考察金属离子混合液、氨基酸混合液及维生素混合液在维生素C发酵中的重要作用。在得出金属离子混合液是细胞生长、KGA合成和L－山梨糖消耗的最显著影响因素的基础上，进一步采用正交试验考察各种金属离子对维生素C发酵的影响。发现，增加Mg²⁺浓度可以促进KGA合成，是维生素C发酵的最显著影响因素。采用优化组合进行维生素C发酵的KGA产量和产率分别为75.2g/L和0.94g/g，与普通培养基相比，KGA产量(67g/L)和产率(0.84g/g)分别提高了12.24％和11.9％。

主权项

1、一种提高2-酮基-L-古龙酸KGA发酵生产稳定性的方法，2-酮基-L-古龙酸又称维生素C，其特征是确定维生素C发酵的关键影响因素，采用正交试验来考察金属离子混合液、氨基酸混合液及维生素混合液在维生素C发酵中的作用；在得出金属离子混合液是细胞生长、KGA合成和L-山梨糖消耗的显著影响因素的基础上，进一步采用正交试验考察各种金属离子对维生素C发酵的影响；发现，增加Mg2+浓度能促进KGA合成，是维生素C发酵的显著影响因素；利用氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)IFO 3293和巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ATCC 21916为生产菌株；优选后确定的发酵培养基以g/L计：山梨糖80，尿素12，碳酸钙5，玉米浆粉5，用硫酸镁或氯化镁调节Mg2+浓度达到0.17g，磷酸二氢钾1；pH 6.7-7.0；摇瓶培养条件：将30℃、200rpm下培养18h的混菌种子以10％的接种量转入发酵培养基于30℃、200rpm条件下培养72h。