[发明专利]小麦禾谷镰刀菌茎腐病苗期接种鉴定方法

摘要

本发明涉及一种小麦禾谷镰刀菌茎腐病(Crown Rot)苗期接种鉴定方法，属于植物保护技术领域，用于快速鉴定、筛选我国小麦资源中具有禾谷镰刀菌茎腐病抗性的小麦种质资源。禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)活化后接种在经过121℃高压灭菌的0.6％绿豆汤液体培养基中，25℃下在摇床中培养72h，获得10⁵个孢子/mL禾谷镰刀菌悬浮液；小麦种子消毒后催芽，萌发后播种在灭菌的土壤中，出苗后10天接种，接种35天后对小麦茎基部进行茎腐病调查。本发明的优点在于：建立了小麦禾谷镰刀菌茎腐病苗期接种鉴定方法，为小麦禾谷镰刀菌茎腐病研究提供了基础。可快速筛选小麦抗性资源，提高小麦资源利用。

主权项

1、小麦禾谷镰刀菌茎腐病苗期接种鉴定方法，其特征在于：1)保存的禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)菌种在超净工作台上于PDA培养基上活化培养，3天后挑取菌丝接种在经过121℃高压灭菌的质量比0.6％绿豆汤液体培养基中，25℃条件下180转/分钟摇床振荡培养72h，过滤，调节菌液浓度至105个孢子/mL获得禾谷镰刀菌悬浮液；2)小麦种子于质量比0.1％升汞中消毒10min后用体积比75％酒精消毒5min后，再用无菌水冲洗3-4次；3)小麦种子消毒后在培养皿中于25℃下萌发，种子萌发后播种于8×8cm营养钵中生长，营养钵中装有经过121℃高压灭菌40min的土壤，生长期温度保持昼20-25℃/夜10-15℃，小麦出苗后10天在每株幼苗茎基部距离土表约0.5-1.0cm处缠绕浸湿的医用脱脂棉球；4)在缠绕棉球内侧与小麦茎部接触处接种0.5mL浓度为105个孢子/mL的禾谷镰刀菌悬浮液，接种后用双层遮阳网覆盖，并采用弥雾器，将接种幼苗置于近100％饱和的相对湿度下48h，而后去除遮阳网，幼苗正常生长管理；5)接种35天后对小麦茎基部进行茎腐病调查，按茎腐病病重指数分为0-5级，即0＝无明显症状；1＝第一叶鞘褐枯小于叶鞘长度10％；2＝第一叶鞘褐枯占叶鞘长度11-25％；3＝第一叶鞘褐枯占叶鞘长度25-50％；4＝第二叶鞘有明显褐枯；5＝第三叶鞘有明显褐枯或全株枯死。以病情指数作为病害评价指标。病情指数＝∑病情级别×该级株数/(调查总株数×最高病级)]×100％。病情指数＜10％为抗病；病情指数10.01-20.0％为中抗；病情指数20.01-30.0％为中感；病情指数＞30.01％为感病。