[发明专利]一种人分化抑制因子3表达载体、融合蛋白及其制备方法

摘要

本发明属于基因工程和医学生物领域，公开了一种人分化抑制因子3表达载体、融合蛋白及其制备方法。该表达载体是将PCR扩增后的hId3基因克隆于融合表达载体pET32a的EcoR I和Sal I位点之间，得到重组表达载体hId3/pET32a。本发明将hId3编码基因定向克隆到原核表达载体，获得hId3融合蛋白表达载体，实现了hId3在大肠埃希菌中的高效表达，表达量占菌体总蛋白的27％，同时提供了一整套工程菌诱导表达和纯化工艺，并以hId3融合蛋白为免疫原制备兔抗hId3多克隆抗体，为进一步研究hId3蛋白的生物学功能及其在临床医学诊断中的应用奠定基础。

主权项

1、一种人分化抑制因子3的表达载体，其特征是将PCR扩增后的hId3基因克隆于融合表达载体pET32a的EcoR I和Sal I位点之间，得到重组表达载体hId3/pET32a，其中hId3基因上游融合了6个组氨酸和硫氧还原蛋白基因片段，利用His标签与Ni离子的亲和作用，融合表达出的蛋白产物用Ni-NAT树脂进一步纯化，hId3与Trx的融合表达增加表达产物的可溶性，携带Trx-His-hId3融合基因的hId3/pET32a处于pET32a的T7启动子控制之下，融合蛋白基因中的外源蛋白基因与Trx之间还具有肠激酶和凝血酶的识别位点，便于从融合蛋白中切下Trx。