[发明专利]从人血浆组分FIV沉淀中分离纯化α1－抗胰蛋白酶的方法

摘要

本发明公开了一种人血浆组分FIV沉淀中分离纯化α1－抗胰蛋白酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(A)血浆沉淀预处理；(B)阴离子凝胶层析；(C)凝胶过滤层析；(D)超滤脱盐浓缩；(E)巴氏病毒灭活；(F)冻干分装；(G)干热消毒。本发明是以人血白蛋白生产过程中产生的弃料FIV组分沉淀为原料，采用层析技术分离纯化一种蛋白酶抑制剂即α1－抗胰蛋白酶(α1－antitrypsin，α1－AT)，建立α1－AT浓缩制剂的生产工艺。本方法制备的产品纯度好、收率高，操作简单易行，同时占用设备少、劳动强度小、能耗低，以白蛋白生产的废弃物料作原料，生产成本低。

主权项

1.一种从人血浆组分FIV沉淀中分离纯化α1-抗胰蛋白酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(A)血浆沉淀预处理：取FIV沉淀加溶解液稀释到蛋白含量2％～5％，pH8.0～8.5，离子强度0.09-0.12，温度控制在2～8℃搅拌过夜，按照0.5％～15％的比例(W/V)加入硅酸盐助剂在2-8℃搅拌1h，固液分离，取上清液，按照0.5％-15％的比例(W/V)再次加入硅酸盐助剂在2-8℃搅拌3h，固液分离，取上清液进样层析柱；(B)阴离子凝胶层析：取凝胶，室温放置达到温度平衡后装柱，以缓冲液洗脱平衡，pH6.0～6.5，平衡量为柱体积的8～12倍，将上清液上样于平衡好的层析柱，用缓冲液洗脱，pH6.0～6.5，温度控制在2～8℃，洗柱8～10倍柱体积，于紫外光280nm波长下自动监测，记录层析图谱，选择性地收集以含有a 1-AT为主要成分的组分；(C)凝胶过滤层析：取凝胶，室温放置达到温度平衡后装柱，以缓冲液平衡，将层析后收集的a1-AT的组分调至pH 7.0-7.5，上样于平衡好的Sephacryl5-200柱，用相同的缓冲液洗脱，同时于紫外光280nm波长下自动监测，记录层析图谱，选择性地收集a 1-AT的组分；(D)超滤脱盐浓缩；(E)巴氏病毒灭活：将浓缩蛋白液加无热原注射用水稀释，加入保护剂，于60±0.5℃保温8～12小时，灭活血浆蛋白制品中的病毒；(F)冻干分装：巴氏灭活的a 1-AT蛋白液经除菌过滤，转入冻干机真空冻干；(G)干热消毒：分装的冻干粉针放置于保温库中保温，灭活病毒，转入成品库全检包装。