[发明专利]实时荧光定量PCR检测柯萨奇病毒A16型的试剂盒

摘要

本发明涉及实时荧光PCR检测试剂盒，特别是涉及以实时荧光定量聚合酶链反应技术早期、快速诊断柯萨奇病毒A16型感染的试剂盒。本试剂盒针对柯萨奇病毒A16型特异的核苷酸序列设计引物和探针，采用一步荧光RT-PCR方法对样本进行扩增，根据扩增曲线判定样本中是否有柯萨奇病毒A16型，并利用线性定量参考品对病毒含量进行定量。通过本发明的试剂盒可实现对粪便、血清、咽拭子、脑脊液、疱疹液等样品中的柯萨奇病毒A16型的检测和定量分析。

主权项

1、一种检测样品中柯萨奇病毒A16型存在的试剂盒，该试剂盒包括：(1)分别装有RNA提取液、PCR扩增反应液、阴性质控品、阳性质控品和定量参考品并加盖密封的多个试剂瓶或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中PCR扩增反应液由耐热DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、脱氧核糖核苷三磷酸、正向引物、反向引物，两末端分别结合有荧光发生基团和荧光淬灭基团的寡核苷酸探针组成，，其特征在于PCR扩增反应液中用于靶多核苷酸扩增的正向和反向引物的序列分别为：正向引物CA16-F1：5’-CAT GCA GCG CTT GTG CTT-3’CA16-F2：5’-CAT GCA ACG ACT GTG CTT TC-3’反向引物CA16-R1：5’-CAC ACA ATT CCC CCG TCT TAC T-3’CA16-R2：5’-CAT AAT TCG CCC GTT TTG CT-3’其中正向引物CA16-F1和CA16-F2可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，反向引物CA16-R1和CA16-R2可向5’和3’端方向各延伸10个碱基。