[发明专利]一种酵母展示脂肪酶催化合成己酸乙酯的方法

摘要

本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成己酸乙酯的方法，该方法包括全细胞酶制剂的生产和己酸乙酯的合成两个步骤，是将脂肪酶基因克隆到毕赤酵母表面展示载体pKFS中构建毕赤酵母表面展示表达载体pKFS－lipase，pKFS－lipase经线性化后转化毕赤酵母宿主菌，筛选获得在毕赤酵母表面展示活性酶蛋白的重组酵母基因工程菌，工程菌经摇瓶发酵，收获菌体真空冷冻干燥24h以上制成全细胞酶制剂；然后采用己酸和乙醇为原料，在表面展示有脂肪酶的毕赤酵母全细胞酶制剂作为生物催化剂的作用下发生酯化反应，得到己酸乙酯产品。该方法反应时间短、产率高、操作稳定性好，且反应后离心收集菌体即可重复利用，大大降低生产成本。

主权项

1、 一种酵母展示脂肪酶催化合成己酸乙酯的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全细胞酶制剂的生产：将脂肪酶基因克隆到携带酿酒酵母絮凝素基因的毕赤酵母表面展示载体(pKFS)中，构建毕赤酵母表面展示表达载体pKFS-lipase(真核絮凝素脂肪酶融合蛋白表达载体)，pKFS-lipase经线性化后转化毕赤酵母宿主菌，筛选获得在毕赤酵母表面展示活性酶蛋白的重组酵母基因工程菌，工程菌经摇瓶发酵，收获菌体真空冷冻干燥24h以上制成全细胞酶制剂；(2)己酸乙酯的合成：采用己酸和乙醇为原料，以全细胞酶制剂为催化剂，以能够溶解己酸和乙醇的液态物质为溶剂发生酯化反应，得到己酸乙酯产品，底物中己酸含量为0.2mol/L～1.8mol/L，己酸和乙醇的摩尔比为1∶0.75～1∶5，酯化反应温度为20-90℃；反应物中全细胞酶制剂用量为10-90g/L(反应体系中的浓度)，反应时间12h以上。