[发明专利]鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株及其构建方法

摘要

本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株及其构建方法，该方法是将自杀性质粒pDS-132与鸭疫里默氏杆菌血清1型基因ΔAcOAT分别进行Sal I单酶切胶回收后，用T4DNA连接酶连接，得到pDS132::ΔAcOAT自杀性质粒；然后通过电转化方法将pDS-132::ΔAcOAT转入鸭疫里默氏杆菌血清1型GDGZ菌株感受态细胞，氯霉素抗性平板筛选重组突变菌株即为鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株。经动物试验证明以10倍LD50剂量攻毒试验表明该减毒菌株毒力已明显下降，以基本无毒力，且该减毒菌株不会无毒力返强，具有制备弱毒活疫苗的潜力。

主权项

1、一种鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)pDS132::ΔAcOAT自杀性质粒的构建将自杀性质粒pDS-132与鸭疫里默氏杆菌血清1型基因△AcOAT分别进行Sal I单酶切胶回收后，并将酶切的自杀性质粒pDS132用CIAP去磷酸化后，用T4DNA连接酶连接，得到pDS132::ΔAcOAT自杀性质粒；所述鸭疫里默氏杆菌血清1型基因△AcOAT由559个核苷酸组成，△AcOAT基因的核苷酸序列如下：1 GCGGTAAATA AGTAACTATG CCAATTTTCG TTATTACCGT TACAATAAAA AATTAGACCT61 GTTTCAATTG CCTGATCATG CAACAAGATT TCTTTAAGTA TCAAGCTCAA ACCACACCTT121 TTGCCTCAGG TTTTGAAGCC GAAAGAGCAG AAGGAAACTA TATTTACGGA AAAGATGGCA181 AAGCCTATCT AGACTTTGTA GCAGGAGTAT CTGCCAATAC TTTGGGACAT TCGCACCCAA241 AAATCATCAA TGCAATTAAG GAACAGGCAG ATAAATACCT TCATATAAGG TCTATGGAGA301 GTATGCACAA GAGAAACCTT AACATTAGGC GTATAAGTAA ATATTTGGGC GTGCCCCAAG361 CCGAGGCTAT TCCCTAAGCT GATGGGTCGG TCTTCGGGCA GTCGCTCTTT TTTAGCCGAA421 GCTCTCCAGT AGCTAAGCCC AGCTTTTCTC CACCTCCGAA AAAAAAGGAG CTCCAACAAT481 GCCCTCCGCC CTCACGCAGT AAAGCTCTAA AAATCATAAG ATTTGGTCTT TAAGATTTGC541 TAGAGTTTGT GTATATTTG；(2)鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株的构建将步骤(1)中构建的pDS132::ΔAcOAT自杀性质粒，通过电转化方法将pDS-132::△AcOAT转入鸭疫里默氏杆菌血清1型GDGZ菌株感受态细胞，氯霉素抗性平板筛选重组突变菌株即为鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株。