[发明专利]利用S1酶切割单链核酸特性的RNA定量检测方法

摘要

本发明公开一种利用S1酶切割单链核酸特性的RNA定量检测方法，主要包括以下步骤：首先，将合适浓度的捕获探针固定于预先包被有链亲和素的酶标板上，备用；然后，超声裂解细胞释放胞内RNA，加入信号探针与目标RNA杂交；杂交后加入S1酶切割单链RNA、DNA和RNA/信号探针杂交体中的单链部分，剩下完全互补的目标RNA/信号探针杂交体；变性剩余的杂交体后捕获探针与信号探针杂交，再利用辣根过氧化物酶放大信号。本发明操作简单，特异性强，在常规的实验条件下即可完成对RNA的定量检测。

主权项

1、一种利用S1酶切割单链核酸特性的RNA定量检测方法，其特征在于包括如下步骤：第一步：捕获探针的固定：将5’端标记有生物素的捕获探针固定于预先包被有链亲和素的酶标板上；第二步：细胞破碎和胞内RNA的释放：采用超声破碎法，在裂解杂交液中加入甲酰胺和酵母tRNA，使裂解杂交液能够失活RNA酶，保护目标RNA不被降解，同时不会引起后续S1酶的活性丧失；第三步：信号探针与目标RNA杂交：取超声破碎后的裂解杂交液，加入信号探针，变性后杂交；第四步：S1酶消化多余探针：第三步杂交完成后，加入S1酶消化液，S1酶能够将游离的信号探针、RNA以及RNA/信号探针杂交体的单链部分消化，剩下与目标RNA完全互补的RNA/信号探针杂交体；第五步：捕获探针与信号探针结合：S1酶消化反应完成后，往体系中加入变性液，变性解离目标RNA/信号探针杂交体，将变性后的溶液加入到第一步固定好捕获探针的酶标板中进行捕获探针与信号探针的杂交反应；第六步：信号检测：第五步杂交完成后，利用辣根过氧化物酶催化的显色反应来放大信号。