[发明专利]一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量PCR快速诊断试剂盒及其应用方法

摘要

本发明所涉及的一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量PCR快速诊断试剂盒及其应用方法，属于病毒核酸检测领域，适用于临床及科研中对CSFV野毒的快速定量检测，可排除CSFV兔化弱毒(HCLV)疫苗免疫带来的假阳性。本发明与现有技术相比具有以下优点：能够对猪瘟病毒野毒感染和疫苗免疫进行鉴别诊断，解决了临床样本检测中不能排除免疫疫苗带了的假阳性问题；特异性好，通过引物高特异扩增和荧光探针的高特异杂交双重控制，具有很高的准确性，假阳性低；灵敏度高；检测速度快，仅1个小时，加上核酸的提取和cDNA的制备，共需2－3个小时；没有后处理，不用杂交、电泳、拍照等过程，不产生污染。

主权项

1、一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量PCR快速诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒包括：a)RNA裂解液、b)反转录反应液、c)荧光定量反应液、d)猪瘟病毒野毒强阳性和临界阳性质控品、e)阴性质控品和f)定量标准品，反转录反应液含有引物RCSFV，其序列为5′-TGCCCACAGTAGGACTAGCAAAC-3′23nt；荧光定量反应液含有上游引物FCSFV和下游引物RCSFV以及荧光探针PCSFV，上游引物FCSFV序列为：5′-TGCCCACAGTAGGACTAGCAAAC-3′23nt；下游引物RCSFV序列为：5′-CAGGACTTAGACCACCCAGGG-3′21nt；荧光探针PCSFV序列为5′-TCGCCACTACGGCTAG-3′16nt，荧光探针PCSFV 5′端标记的是荧光报告基团FAM，3′端标记的是非荧光淬灭基团，3′端另标记了MGB结合物。