[发明专利]三种甘薯病毒的多重RT－PCR检测方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及三种甘薯病毒的多重RT－PCR检测方法。该方法通过，分别合成甘薯潜隐病毒引物、甘薯G病毒引物和甘薯羽状斑驳病毒的引物，然后提取样品中病毒的总RNA，进行反转录；将病毒的上、下游引物分别混合后置于一个PCR反应体系中，置于PCR反应体系中，以反转录产物作为模板，进行PCR扩增；最后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。本发明建立了可同时检测甘薯三种病毒的多重RT－PCR检测技术，即在一次PCR反应中同时检测三种甘薯病毒，有效地提高了检测效率，降低了生产成本；通过对三种主要甘薯病毒的高效检测，可确保脱毒甘薯的质量和增产效果。

主权项

1、三种甘薯病毒的多重RT-PCR检测方法，其特征在于，(1)分别合成甘薯潜隐病毒引物SEQ 1、SEQ 2，甘薯G病毒引物SEQ 3、SEQ 4和甘薯羽状斑驳病毒引物SEQ 5、SEQ 6；其中，SEQ 1：5′-CTTCAGTGACGTTGCTGAAGC-3′，SEQ 2：5′-TGCACACCCCTCATTCCTAAG-3′，SEQ 3：5′-CCAAATATCAATGGTGATTGGGT-3′，SEQ 4：5′-CCACGCATTCCAAGTAGTGTGTGT-3′，SEQ 5：5′-GCACCAATGGCAAATGGAAGAATAG-3′，SEQ 6：5′-GAGGTTATGTATATTCCTTGTAAC-3′；(2)提取样品中病毒的总RNA，作为PCR模板，进行反转录；(3)将所述SEQ 1、SEQ 3、SEQ5引物等体积混合形成上游引物混合物，将所述SEQ 2、SEQ 4、SEQ 6引物等体积混合形成下游引物混合物，然后将所述上、下游引物混合物置于PCR反应体系中，以反转录产物作为模板，进行PCR扩增；(4)用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。