[发明专利]基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法

摘要

本发明提供了基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，属于分析化学技术领域。首次利用免标记银纳米探针发展了一种简便但灵敏度好、选择性高的酶反应比色检测方法。用此比色方法，可以通过银纳米探针颜色的变化来监测牛小肠碱性磷酸酶催化的去磷酸化反应和牛心蛋白激酶A催化的磷酸化反应。该方法对牛小肠碱性磷酸酶的检测限为1unit/mL，对牛心蛋白激酶A的检测限为0.022unit/mL。尤为重要的是，该方法还可用于酶活性抑制的分析和复杂生物样品中酶含量的检测。本发明的方法具有的简单、灵敏、便宜等优点外，且用银纳米而不是金纳米作为比色探针，进一步拓宽了比色传感器的研究和应用范围。

主权项

1、基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法，其步骤如下：(1)参考文献方法合成银纳米探针(参考文献；Doty，R.C.；Tshikhudo，T.R.；Brust，M.；Fernig，D.G.，Extremely stable water-solubleAg nanoparticles.Chem.Mater.2005，17，(18)，4630-4635)；(2)将5mM三磷酸腺苷和牛小肠碱性磷酸酶加入到反应缓冲溶液中，混合均匀，37℃水浴反应20min；所述的5mM三磷酸腺苷∶牛小肠碱性磷酸酶∶反应缓冲溶液的体积比为1∶1∶4；所述的反应缓冲溶液为含1mM MgCl2的pH9.0的50mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液；所述的牛小肠碱性磷酸酶浓度为0.001unit/μL到0.1unit/μL；若进行比色反应的特异性测定，将牛小肠碱性磷酸酶替换为25μM牛血清白蛋白、或10μMα-凝血酶、或2.1μM胰蛋白酶即可；(3)向(2)中的反应液中加入银纳米探针和0.5M NaCl水溶液；所述的5mM三磷酸腺苷∶银纳米探针∶0.5M NaCl水溶液的体积比为1∶40∶3；(4)将(3)中反应液，与水混合均匀，马上测定反应溶液的吸收光谱，或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化，完成基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法；所述的(3)中反应液∶水的体积比为1∶3。