[发明专利]甘蔗宿根矮化病菌的检测方法

摘要

一种甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，1.将待测样本组织斑印在硝酸纤维素膜上；2.分别依次把硝酸纤维素膜转移至含0.1％甘蔗宿根矮化病特异性抗血清的封闭缓冲液中孵育；3.把硝酸纤维素膜转移至含0.01％碱性磷酸酶标记抗体、1％脱脂奶粉的TBST缓冲液中孵育；4.把硝酸纤维素膜转入底物/缓冲液中显色；5.结果判别：硝酸纤维素膜显色后组织斑上呈紫红色即可确定检测样本中有甘蔗宿根矮化病菌存在，组织斑不显色则检测样本中没有甘蔗宿根矮化病菌；该方法能快速准确的检测甘蔗宿根矮化病菌，检测结果易于目测判断，且操作简单，取样少，节省劳力，结果可靠，不易受污染，不需特殊仪器，也不需特殊条件，适合于田间大批量样品检测。

主权项

1、一种甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，其特征在于按如下步骤进行：1)、制样和组织印迹：取甘蔗中下部茎节，切成9～11cm长，取中间部分将其横切成平面，将切面在硝酸纤维素膜上垂直点压10～15秒，获得印迹斑；2)、封闭：将封闭缓冲液倒入装有硝酸纤维素膜的培养皿里，37℃下孵育45min，倒去培养皿里封闭缓冲液，加入TBST缓冲液，使硝酸纤维素膜浸入其中，轻轻转动几下，再弃去TBST缓冲液；3)、加抗体：把硝酸纤维素膜浸入含0.1％甘蔗宿根矮化病特异性抗血清和1％脱脂奶粉的TBST缓冲液中，37℃下孵育2h，再用TBST缓冲液洗膜3次，每次3min；4)加酶标抗体：把硝酸纤维素膜浸入含0.01％碱性磷酸酶标记抗体和1％脱脂奶粉的TBST缓冲液中，37℃下孵育2h，用TBST缓冲液洗膜4次，每次3min；5)加底物显色：把硝酸纤维素膜转入底物/缓冲液BCIP/NBT二片加20ml双蒸水溶解中显色5～10min，取出后用蒸馏水冲洗，自然干燥；6)结果判别：肉眼观察或显微镜观察判别，感染甘蔗宿根矮化病菌的样品组织斑上呈紫红色，不感染的组织斑上不显色。