[发明专利]含毛囊人工皮肤的制备方法及由其制备的人工皮肤

摘要

本发明属生物医学，涉及人工皮肤的制备方法，尤其涉及含毛囊人工皮肤的制备方法以及由该方法制备得到的人工皮肤。含毛囊人工皮肤的制备方法，其包括以下步骤：(1)毛囊上皮细胞制备；(2)毛乳头细胞培养；(3)含毛囊人工皮肤培养。本发明具有以下特点：(1)首次在皮肤支架上用人毛囊细胞制备含毛囊人工皮肤，比用动物细胞制备的人工皮肤的抗原性大大减弱；(2)该人工皮肤含有毛囊，使其具有一定的皮肤生理功能；(3)具有不易收缩、可吸收特点；(4)可作为临床上大面积烧创伤患者的创面覆盖的材料，促进创面的正常化愈合；(5)解决了大面积烧创伤中皮肤来源困难的难题；(6)制备方法设计合理、操作方便，容易规模化生产。

主权项

1.含毛囊人工皮肤的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)毛囊上皮细胞制备：分离人头皮毛囊，加入分离酶，消化，再将毛囊移入缓冲盐溶液中，飘洗去除分离酶，从毛囊中挤出毛干，用0.125-0.25％胰蛋白酶加EDTA消化成单个毛囊上皮细胞，离心去除胰蛋白酶，用角质形成细胞培养基培养备用；(2)毛乳头细胞培养：将去除毛干的人毛囊用0.1-0.5％的胶原酶VI消化，待包绕毛囊的真皮鞘消化成单细胞而其内的毛乳头尚未开始消化时，中止消化，液洗，低速离心去除胶原酶VI，吸沉淀过200-400目的筛网，倒冲筛网，用角质形成细胞培养基培养，进行毛乳头细胞培养备用；(3)含毛囊人工皮肤：将传代培养的毛乳头细胞与毛囊上皮细胞按5∶1至1∶5比例的进行细胞混合，分别注射到皮肤支架上，移植细胞的浓度分别为2.5×104至1×106/ml，然后将皮肤支架置入多孔培养板中，每孔加入角质形成细胞培养基培养，浸没培养1～3周后再行气液界面培养，培养5～10周。