[发明专利]一种干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用

摘要

本发明提供一种小鼠胚胎干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用，主要用于以过氧化物酶体增殖激活受体为靶点的促细胞分化剂筛选。也可利用干细胞衍生化肝细胞模型阐明肝脏发育能量代谢相关的PPARs家族表达谱和功能，揭示胚胎肝脏发育的生命现象本质。也可利用干细胞衍生化肝细胞模型，构建以PPARs家族为靶点的高效率药效筛选模型，进行调节肝脏能量供应药效初步筛选与评价，发现新一类促进干细胞分化为肝细胞的能量代谢诱导剂。本发明开拓了干细胞衍生化肝细胞模型的一种新用途，即能作为肝脏发育能量代谢研究的替代模型，明确肝脏线粒体能量系统发育相关的PPARs家族表达特征，可用于以PPARs为靶点的促肝细胞能量代谢分化剂筛选。

主权项

1.一种小鼠胚胎干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用，所述小鼠胚胎干细胞体外定向分化为肝细胞模型通过以下步骤构建：采用悬滴培养法，将小鼠胚胎干细胞以600个细胞/30μl滴的密度接种于培养皿盖子内表面上，然后翻转盖子，使盖子上的小滴倒挂成悬滴，培养5天形成拟胚体，再将拟胚体转移到放有用明胶包被的24孔板内进行常规贴壁培养，用倒置显微镜每天观察细胞，以捕捉肝细胞定向分化的形态变化，同时采用免疫荧光法检测肝细胞特异性蛋白表达，以白蛋白特异性染色确定小鼠胚胎干细胞分化而来的是肝细胞。