[发明专利]能启动A20基因表达的人工锌指蛋白转录因子及用途

摘要

本发明涉及能启动A20基因表达的人工锌指蛋白转录因子及用途。其制备方法包括：与A20基因启动子区靶序列特异性结合的含锌指基序多肽制备；人工转录因子合成：人工转录因子包括结合域、功能域、核定位信号及跨膜域，连接顺序为：跨膜域－核定位信号－结合域－功能域，将制备的含3～6个锌指基序的多肽融合到NF－p65或VP64的功能区，加上核定位信号，在其N－末端加上9个精氨酸或Tat蛋白的12个氨基酸作为蛋白转导域；本发明能有效跨过细胞膜进入细胞内启动A20基因的表达，具有良好抗血管再狭窄、动脉粥样硬化、心肌肥大、严重炎症损伤等性能，在制备克服器官移植排斥反应或心肌肥大或严重炎症损伤时细胞保护药物中的用途。

主权项

1、一种能启动A20基因表达的人工锌指蛋白转录因子，其蛋白结构包括结合域、功能域、核定位信号及跨膜域；其特征是：其结合域为与A20基因启动子区靶序列(18bp)特异性结合的锌指基序多肽，其中：(1)结合域A20基因启动子区靶序列(18bp)为SEQ ID NO：1；所述特异性结合的锌指基序多肽为以下6条短肽中的3～6条，通过TGEKP连接构成融合多肽，该融合多肽的N-端氨基酸序列为LEPGEKP-，C-端为TGKKTS：所述6条短肽的锌指基序按排列的顺序为：SEQ ID NO：2QSGDLRRSEQ ID NO：3SKKHLAESEQ ID NO：4QSGNLTESEQ ID NO：5QNSTLTESEQ ID NO：6DPGHLVRSEQ ID NO：7RNDTLTE上述锌指基序N-端序列为相同的接头，设定为YKCPECGKSFS-，C-端为接头HQRTH；或(2)结合域A20基因启动子区靶序列(18bp)为SEQ ID NO：8；所述特异性结合的锌指基序多肽为以下6条短肽中的3～6条，通过TGEKP连接构成融合多肽，该融合多肽的N-端氨基酸序列为LEPGEKP-，C-端为TGKKTS：所述6条短肽的锌指基序按排列的顺序为：SEQ ID NO：9 THLDLIRSEQ ID NO：10 HTGHLLESEQ ID NO：11 QRAHLERSEQ ID NO：12 TSGELVRSEQ ID NO：13 RNDTLTESEQ ID NO：14 RSDKLTE上述锌指基序N-端序列为相同的接头，设定为YKCPECGKSFS-，C-端为接头HQRTH；或(3)结合域A20基因启动子区靶序列(18bp)为SEQ ID NO：15；所述特异性结合的锌指基序多肽为以下6条短肽中的3～6条，通过TGEKP连接构成融合多肽，该融合多肽的N-端氨基酸序列为LEPGEKP-，C-端为TGKKTS：所述6条短肽的锌指基序按排列的顺序为：SEQ ID NO：16 RSDNLVRSEQ ID NO：17 QLAHLRASEQ ID NO：18 SKKHLAESEQ ID NO：19 QSGHLTESEQ ID NO：20 DCRDLARSEQ ID NO：21 QSGDLRR上述锌指基序N-端序列为相同的接头，设定为YKCPECGKSFS-，C-端为接头HQRTH；或(4)结合域A20基因启动子区靶序列(18bp)为SEQ ID NO：22；所述特异性结合的锌指基序多肽为以下6条短肽中的3～6条，通过TGEKP连接构成融合多肽，该融合多肽的N-端氨基酸序列为LEPGEKP-，C-端为TGKKTS：所述6条短肽的锌指基序按排列的顺序为：SEQ ID NO：23 DCRDLARSEQ ID NO：24 RSDKLTESEQ ID NO：25 SKKHLAESEQ ID NO：26 TTGNLTVSEQ ID NO：27 QRAHLERSEQ ID NO：28 SRRTCRA上述锌指基序N-端序列为相同的接头，设定为YKCPECGKSFS-，C-端为接头HQRTH；或(5)结合域A20基因启动子区靶序列(18bp)为SEQ ID NO：29；所述特异性结合的锌指基序多肽为以下6条短肽中的3～6条，通过TGEKP连接构成融合多肽，该融合多肽的N-端氨基酸序列为LEPGEKP-，C-端为TGKKTS：所述6条短肽的锌指基序按排列的顺序为：SEQ ID NO：30 ERSHLRESEQ ID NO：31 RSDDLVRSEQ ID NO：32 QSGNLTESEQ ID NO：33 DPGHLVRSEQ ID NO：34 RSDDLVRSEQ ID NO：35 RSDELVR上述锌指基序N-端序列为相同的接头，设定为YKCPECGKSFS-，C-端为接头HQRTH。