[发明专利]白唇竹叶青蛇毒5＇－核苷酸酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种白唇竹叶青蛇毒5′－核苷酸酶的制备方法，该制备方法依次包括以下步骤：(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理；(2)DEAE－SepHadex A－25阴离子交换层析初步分离；(3)SepHadex－G－100层析纯化；(4)CM－SepHadexC－50离子交换层析进一步纯化。本发明的有益效果：本发明首次从白唇竹叶青(Trimeresurus albolabris)蛇毒中提取并纯化白唇竹叶青5′－核苷酸酶，制备过程成本低，并且，所制备的白唇竹叶青5′－核苷酸酶纯度高，酶活性大。

主权项

1.一种白唇竹叶青蛇毒5′-核苷酸酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理：取白唇竹叶青蛇毒液，按体积比1∶3～1∶6添加到浓度为0.01～0.05mol/L、pH为8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液中，在温度为4～20℃、转速为3000～5000r/min的条件下离心10～20min，取上清液备用；(2)DEAE-Sephadex A-25层析柱初步分离：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液平衡柱子，然后将步骤(1)所得的上清液加入DEAE-SepHadex A-25层析柱上，再用浓度0.01～0.05mol/L、pH8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱流速为18～36ml/h，收集洗脱液、低温浓缩，获得粗品a；(3)Sephadex-G-100层析柱纯化：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液平衡柱子，然后将粗品a重新溶解在浓度为0.01～0.05mol/L、pH为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液中，加入SepHadex-G-100层析柱上，用浓度为0.01～0.05mol/L、pH为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱流速为3～12ml/h，用试管收集洗脱液，将洗脱液合并、低温浓缩，获得粗品b；(4)CM-SephadexC-50进一步纯化：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH 5.5～6.6的NaAc缓冲液平衡柱子，然后将粗品b溶解在浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6的NaAc缓冲液中，加入CM-SepHadexC-50层析柱上，再用浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6的NaAc缓冲液洗脱；接着用浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6NaAc缓冲液线性梯度洗脱，洗脱液中NaCl的浓度范围为0.02至1mol/L，洗脱流速为18～24ml/h，收集此时的洗脱峰、除盐后冻干，获得产品。