[发明专利]一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法

摘要

本发明提出一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法，采用的种子细胞接种载体为透明质酸，接种步骤为：首先将人或动物的椎间盘髓核细胞与透明质酸溶液进行混悬，再将支架材料用培养液浸泡后吸干水分待用，然后用细胞悬液缓慢滴加至支架材料，静置，最后将细胞－支架复合体移入到培养瓶中，缓慢加入培养液培养，直到细胞在支架材料内进行增殖并合成细胞外基质，即可移植入动物或人体内进行研究或治疗。该方法简单，具有更加的安全、仿生并且可以提高所构建组织的生物学性能，提高种子细胞的上架率和种子细胞在支架内分布的均匀程度等优点。

主权项

1、一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法，所述方法采用的种子细胞接种载体为透明质酸，其步骤如下：(1)首先将人或动物的椎间盘髓核细胞与用不含血清的DMEM/F12培养液配制的透明质酸溶液进行混悬，保证细胞悬液中髓核细胞的终浓度为1×105-1×106个/ml，透明质酸的终浓度为0.001-0.01mg/ml；(2)将本身不含有透明质酸成分的组织工程髓核支架材料用不含血清的DMEM/F12培养液浸泡后吸干水分，放入培养皿中待用；(3)将步骤(1)所制的细胞悬液缓慢滴加至支架材料，在37℃，5％CO2 的孵箱内静置；(4)30分钟后将细胞-支架复合体移入到培养瓶中，缓慢加入10％胎牛血清的DMEM/F12培养液，在37℃，5％CO2培养条件下进行培养，每隔2-3日进行换液，直到细胞在支架材料内进行增殖并合成细胞外基质，此时将细胞-支架复合体移植入动物或人体内进行研究或治疗。